Co-immunoprécipitation:?:

[invitea28477d0]

Je désirerais des informations sur la co-immunoprecipitation afin de comprendre son principe svp. Si vous connaissez des sites parlant du sujet je suis egalement preneur

Merciiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiiii
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[Yoyo]

BONJOUR,

Le principe est simple. Tu souhaites montrer que deux protéines A et B interagissent ensemble. Avec un anticorps dirigé contre A tu vas tenter de purifier non pas seulement A mais aussi B! si tu y arrives tu montres par la meme que les deux protéines interagissent. Reste a determiner si cette interaction est directe ou non.

YOyo

[invitea28477d0]

ah ok!!!!!!!!!!!
merci bcp

[invitea28477d0]

[QUOTE=anth]ah ok!!!!!!!!!!!


Cependant j'aurais besoin d'informations plus detaillées sur le protocole employé, car je bloque sur un article ou figure cette technique. Il y a forcement un truc qui m'echappe!

merci bcp

[A voir en vidéo sur Futura]

[Yoyo]

Et si tu nous disais ce qui te pose probleme? ca permettrait au moins d'engager une discussion car franchement actuellement tes questions sont assez seches!
N'oublie pas que nous sommes sur un forum de discussions qui ne vit que par les interventions de ses membres.

On n'est pas non plus une bibliotheque...si tu cherches un article parlant de ca, je pense que google ou pubmed devraient t'aider!

yoyo

[invite6e00ad7f]

Salut,

la technique dont tu parles ce ne serait pas du double hybride en quelques sortes?

[Yoyo]

Salut,

la technique dont tu parles ce ne serait pas du double hybride en quelques sortes?

Non, meme si ces deux techniques permettent d'identifier les interactants d'un complexe.

Yoyo

[invite6e00ad7f]

décidémment tu me corriges partout ce soir Yoyo !

[inviteb65f2ecd]

Bonjour,

j'ai un problème avec mes IP, je ne parviens pas à voir une de mes 2 protéines qui est tagée HA.
j,ai essayé d'utiliser un tampon avec 1% triton, ou avec 0.5%, mais pas plus de résultats. j'ai joué un tout petit peu sur les concentration en sel, mais je suis pas allée plus loin.
je me suis dit que c'était peut-être, mon tag qui était altéré ou mon Ac anti tag, mais d'autres l'utilise est tout semble fonctionner.
Auriez-vous une solution ?

Ma protéine posséde une séquence IRES_GFP, ce qui fait que lorsque je transfecte mes cellules HEK je vois que la transfection a fonctionné puisque mes cellules sont fluo à 80%. Ce peut-il que le ribosome se fixe uniquement sur la séquence IRES et permette ainsi l'expression du GFP sans que la protéine en amont soir exprimée ?

merci pour les informations que vous em communiquerez
bonne journée
belouga

[piwi]

c'est precisement le but d'un IRES!
IRES= internal ribosome entry site.

Donc si ca se trouve tu shuntes totalement le start de traduction pour ne traduire que ta GFP.

[inviteb65f2ecd]

ouais mais normalement la séquenxce IRES n'est pas sensée bloquer la tranduction de ce qui est en avant mais permettre au ribosome d'avoir la séquence start pour traduire ce qui tu mets à la suite. je sais précisément à quoi set l'IRES je l'ai volontairement ajouté à la suite de mon gène d'intérêt pour des raisons évidentes de commodités lors des transfections et pour les transductions par la suite.
ce qui me turlupine c'est la non détection de ma protéine d'intérêt.

[inviteb2c28889]

bonjour, je comprends le but de la co-immunoprecipitation mais je n'arrive pas à comprendre comment intervient la proteine B. Pourriez vous m'indiqué un shéma clair sur un site ou m'expliquer l'apparition de cette 2eme proteine où est elle fixé?

Merci de votre réponse
cordialement

[mantOs]

bonjour, je comprends le but de la co-immunoprecipitation mais je n'arrive pas à comprendre comment intervient la proteine B. Pourriez vous m'indiqué un shéma clair sur un site ou m'expliquer l'apparition de cette 2eme proteine où est elle fixé?

Merci de votre réponse
cordialement

Si apres notre co immunoprecipitation en utilisant un anticorps anti A on revele la protéine B (lors d'un westernblot par exemple) c'est que la protéine B était liée à la protéine A .

[invite20594ea0]

Bonjour à tous,
je suis nouvelle sur ce forum, je me suis inscrite car j'ai vu qu'il y avait des informations sur la co-immunoprécipitation et des échanges de connaissances intéressant.
Maintenant que j'ai compris le principe de la coimmunoprécipitation, j'aimerais savoir si vous aviez des info sur les méthodes de séparation des molécules A et B?
merci