Comment synthetiser une peptide recombinant ?

[invitee41121ed]

Bonjour,
Quels sont les moyens disponibles aujourd'hui pour obtenir des peptides recombinants (dans mon cas de petite taille >30 AA) ?
Est il plus intéressant de les commander à des entreprises commerciales?
Merci d'avance
-----

[Flyingbike]

Bonjour

Ca dépend de l'application que tu veux en faire mais aussi de sa structure, de la nécessité ou non de le purifier, de la disponibilité de la séquencee, de sa composition en acides aminés....

Certains peptides sont très faciles à synthétiser chez la bactérie, d'autres pas (par exemple ceux nécessitant des modifications co ou post traductionnelles (encore que maintenant on fait n'importe quoi chez la bactérie, y compris lui faire inclure des AA non naturels )
Il est possible de faire de la synthèse in vitro (exemple sur lysat de réticulocytes). Pour la grande échelle on pourra aussi utiliser de la synthèse chimique.

[invitee41121ed]

Merci pour ces renseignements. Mon peptide ne nécessite aucune modification post-traductionnelle. Par contre, une bonne pureté sera nécessaire. En outre, j'aurais besoin d'une relativement grande quantité de ces peptides. La méthode chimique apparait donc comme la meilleure dans mon cas ?

Comment pourrais-je me procurer un protocole sur internet ?

[Flyingbike]

quand je parlais de la méthode chimique, je parlais des techniques industrielles à grande échelle. Donc pas applicable dans un labo. Si tu peux nous en dire plus sur ce peptide, son utilisation, la quantité nécessaire ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitee41121ed]

Je testerai la capacité de ces peptides à inhiber la réponse d'un agoniste sur un récepteur, dont l'EC 50 est de l'ordre du pico Molaire.
J'ignore encore les quantité utilisées mais je travaillerai sur des préparations cellulaires (diametre environ 1cm) à des concentrations en peptides de l'ordre du micro molaire.
Ces peptides seront la base de mon projet, ainsi j'estime avoir besoin de 1 micro mole?

[Flyingbike]

Ok.
-Travail sur cellules, interactions protéine/protéine : besoin d'une bonne purification
-étude d'une interaction : pas possible d'ajouter un tag en vue de la purification au risque de gêner l'interaction
-pas besoin de quinze kilos


tu pourrais le faire toi même mais il faudrait le purifier (genre HPLC ou autre, pas forcément a la portée de tout le monde)

a mon avis le plus simple est de demander un devis pour le faire produire.

[invitee41121ed]

Merci beaucoup pour ces remarques. Mais a propos du tag, ne serait-il pas envisageable de l'utiliser pour la purification, et, ayant aussi inséré un site de clivage, d'utiliser une protéase en vue de retirer le tag? Par exemple un tag GST.

[Flyingbike]

c'est pas idiot, maiis in faudrait repurifier apres la protéase, non ?

[invitee41121ed]

Et bien justement, après la digestion de ces peptides, je le passerai à travers une colonne de GST pull down. (la GST se fixera au glutatione -de mémoire) . C'est sans doute périlleux EDIT : oui j'ai oublié la protease... hum... immunoprécipitation !

[invite77757f59]

Laboratoire de synthèse des biomolécules

Tu peux peut-être te tourner vers des labo de chimie spécialisés dans les bioméolécules?
Il y en a pas mal sur les grands pôles scientifiques où des partenariats Chimie / biochimie existent...