Mise en évidence de l'albumine sérique par la méthode BCP-dye binding

[TanguyE]

Bonjour,

Je cherche à mettre au point une méthode de détection de l'albumine sérique par le biais d'un marquage au Bromocresol Purple (BCP).

J'ai lu dans diverses publi que cette méthode n'était pas très précise, notamment en présence de billirubine dans le sérum. Certains d'entre vous ont-ils déjà utilisé cette méthode ou l'équivalent BCG (Bromocresol green). En sachant que cette dernière serait encore moins précise (d'après ce que j'ai lu).

Mon objectif est de faire ce test dans des plaques 96 puits, j'ai lu qu'un rapport de 1:200 entre échantillon et solution de marquage était utilisé pour des volumes de 2/3ml, pensez-vous que c'est extrapolable à des volumes de 200/300µl?

Merci d'avance

Cordialement
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[TanguyE]

Vu le succès rencontré par mon sujet , je m'auto-répond pour partager mon expérience dans l'espoir qu'elle puisse servir à d'autres.

Pour commencer, si comme moi dans votre enfance vous avez été privés de la panoplie du petit chimiste avec laquelle on peut faire plein de trucs rigolo avec des solutions qui changent de couleur, vous allez être servis Du violet, du jaune, du bleu... c'est noël dans vos bechers

Le protocole est assez simple et ressemble beaucoup à une recette de cuisine, celui que j'ai utilisé est dispo dans la publi en pièce jointe. Par contre les volumes utilisés sont assez énormes puisqu'ils se servent d'un automate pour les analyses.

Mon objectif est de faire ce test dans des plaques 96 puits, j'ai lu qu'un rapport de 1:200 entre échantillon et solution de marquage était utilisé pour des volumes de 2/3ml, pensez-vous que c'est extrapolable à des volumes de 200/300µl?

Oui c'est faisable, par contre j'ai préféré faire du 1:100 dans un volume final de 200µl. 4µl de sérum utilisé (en faisant un dépot en duplicat) c'est moins que le minimum requis pour certains kits ELISA et pas besoin de s'em...bêter à faire des dilutions au 1:5 000 000éme .

En conclusion:
Aspects positifs: économe en échantillons, rapide (moins de 15 min pour passer une quarantaine d'échantillons), d'une simplicité déconcertante et d'un cout de revient par échantillon infinitesimal.
Aspects négatifs: moins sensible qu'un ELISA, peut être biaisé dans certaines conditions (voir la littérature à ce sujet).

Voilà, si vous avez des questions vous savez ou me trouver.

[LXR]

La pièce jointe étant une publication, je dois savoir si elle est en accès libre ou restreint (payant) afin de pouvoir la valider ou pas.

Merci.

LXR pour la modération

[TanguyE]

Oups j'ai pas du tout pensé à ça. Désolé...

Je viens de vérifier, elle est en accès libre.

[A voir en vidéo sur Futura]