Extraction plasmide - centrifugation

[invitec45abc54]

Bonjour,

une petite question simple, mais dont la réponse pourra m'éviter de perdre de l'argent et du temps...

Je dois purifier un plasmide à l'aide du kit QIAGEN - EndoFree Plasmid Maxi Kit.
Rien de très compliqué dans le protocole, sauf les étapes de centrifugation du plasmide (à la fin).
Je dois centrifuger 30min à 15000G mon plasmide (dans un Falcon 50 car dans un volume d'environ 40mL à cette étape). Il est possible, pour ceux qui n'ont pas LA centri ou LE rotor qui va bien, de faire tourner à 5000G seulement (Falcon 50 coniques) mais pendant 1h.

Ma question : la centri dont nous disposons permettant de centrifuger des Falcon50 ne va que jusqu'à 4816G..

A votre avis, entre 5000 et 4816G, est-ce que je risque de perdre mon plasmide (en gros qu'il ne culote pas...)???

Merci d'avance pour votre expertise

Marc
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[piwi]

Je n'utilise pas ce kit en particulier mais j'en utilise un autre avec la même indication de centrifugation 30 mins à 15 000g. N'ayant pas envie de traverser tout l'institut pour utiliser la bonne centri je fais depuis des années une centri à 4 000g jusqu'à ce que mort s'en suive (c'est à dire que je l'oublie un bon moment).
Récemment j'ai même centrifugé durant 30 mins et pas de problème, on récupère des plasmides.

Cordialement,
piwi

[invite30157012]

Bonjour! Moi aussi je centrifuge 1h à 4000g (pendant l'heure du déjeuner c'est pratique!) et aucun problème!
Cordialement,

[invitec45abc54]

Bonjour,

merci à vous deux, Piwi et Delphinette, je vais lancer la manip demain matin...

Une dernière question : congelez vous vos culots de bactéries avant extraction? Si oui, quelle est la plus longue durée pendant laquelle vous les avez "oublié" au congélateur sans altération des plasmides??

Merci

Marc

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

J'ai fais une prep de plasmide aujourd'hui à partir d'une culture de bactéries oubliées depuis 3 semaines à 4°C.
Je ne vois pas vraiment l'intérêt de congeler les culots, autant garder la culture. Si vous avez un doute il suffit d'en relancer une nouvelle à partir de la première.

Cordialement,
piwi

[invitec45abc54]

Yep,

oui c'est aussi une solution sympa...
Mes culots sont congelés depuis 5 semaines, je verrai le résultat...Sinon oui j'en relancerai une à partir de souches transformées congelées.

Cordialement

Marc