Resistance à la zeocine pourquoi ?

[invite2475de1a]

Bonjour tout le monde,

je souhaite vous demander si vous avez une petite idée sur la resistence à la zeocine chez les baterie Ecoli.

En effet , j ai eu un phenoméne bizarre cette semaine au labo :

j utilise la zeocin pour screener des bactéries transformées par un plasmide PICZ contenant le géne de resistance a cet antibiotique et donc pour controler le clonage...

apres transormation et etalement j ai repiqué les colonies ayant poussé sur boite pour en faire des preculture ds de un milieu LB+Zeocine et elles ont bien poussées.

En procédant à l'extraction de l'ADN plasmidique pour controler la presence du plamside recombinant, je n'ai trouvé aucun plasmide et ça m'a intrigué comment est ce possible ??? d'ou est ce qu'elles tiennent cette resistance?? ce sont pas des bactérie satellite a mon avis selon leur taille..et j 'ajoute que le controle contamination : LB + zeo + cellules compétentes est OK

Merci de me donner une explication à ce phenoméne car j veux pas avancer tant ke j ai pas elucider ce mystére.
-----

[invitedd8b3db1]

Bonjour, l'une des possibilités c'est que ta préparation contenant le plasmide soit contaminée par une bactérie résistante à la zéocine.

[invite2475de1a]

oui on pense à ça au premier lieu sauf que mon controle contamination est OK pas de colonie qui poussent sur milieu additionné de zeocine...

[invitedd8b3db1]

Ce que je veux dire c'est que dans ton échantillon test, tu as des solutions que tu ne contrôles pas: le tampon dans lequel est ton plasmide, le tampon dans lequel tu le dilue, et d'autres comme les tampons pour ligation... en fonction de ton clonage. Ce n'est évidemment qu'une supposition. Une autre possibilité serait le temps que tu laisses incube. Pour mes clonages (j'ai jamais utilisé la zéocine), les colonies qui poussent après 18h d'incubation sont toujours sans plasmides, pourquoi? je sais pas, mais cela c'est toujours vérifié.

[A voir en vidéo sur Futura]