UV et dimères de pyrimidines

[invite326288e4]

Bonjour,
je viens poster aujourd'hui car j'aurai besoin d'un petit coup de main...
J'ai un exposé à faire où il s'agit de mette en place un projet à partir de mots clés, et je sèche un peu pour tout dire... Mes mots clés sont : apoptose, molécule avtice, UV et ex vivo.
J'ai décidé de parler de la maladie xéroderma pigmentosum, une maladie génétique d'intolérance aux UV. A partir de cultures ex vivo de peau de patients atteints de la maladies je propose d'étudier l'action de molécules filtres UVB et UVA à différentes concentrations. pour contrôler le niveau d'apoptose des cellules traitées, selon les concentrations, une étude par cyto. Le problème c'est que je n'arrive pas à trouver comment détecter des dimères de pyrimidine... séquençage? HRM? courbe de fusion? ...
Merci d'avance pour vos réponses
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[Edelweiss68]

Bonjour,

Voilà une approche, je ne sais pas si il y en a d'autres.

"[...]c'est donc 12 lésions qu'il faut pouvoir quantifier dans l'ADN. Pour cela, nous réalisons tout d'abord une hydrolyse enzymatique qui libère les bases normales sous forme de nucléosides. Les photoproduits sont eux hydrolysés en dinucléosides monophosphate, soit deux nucléosides reliés par un groupement phosphate. Le mélange est ensuite séparé par chromatographie liquide (HPLC) et analysé en ligne d'abord par un détecteur UV qui permet de quantifier les nucléosides normaux, puis par un spectromètre de masse en mode tandem (MS/MS) qui permet de doser les lésions. En effet, ces dernières étant en quantités infimes (106 fois plus faibles que les bases normales dans les cellules), il faut une détection à la fois spécifique et sensible pour les mesurer précisément. En utilisant cette approche, il est ainsi possible, en une seule injection de quantifier les 12 photoproduits bipyrimidiques ainsi que de déterminer la quantité d'ADN analysée. Les résultats sont en général exprimés en nombre de photoproduits pour 104 ou 106 bases normales."

http://inac.cea.fr/Phocea/Vie_des_la...php?id_ast=140

[invite326288e4]

merci pour ta réponse, je vais aller faire quelques recherches de plus mais ce que tu m'as donné est déjà clair et je pense que je vais pouvoir utiliser ca ^^
merci beaucoup

[Edelweiss68]

De rien, bon courage pour votre exposé !

[A voir en vidéo sur Futura]