protocole extraction ARN (pas de kit, ni trizol)

[invitef7159ceb]

Bonjour,

Est ce que quelqu'un aurait un protocole d'extraction d'ARN pour des cellules Hela ?
Mais sans trizol, et ni de kits svp....

Je vous remrcie
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[Yoyo]

salut

Un protocol d'extraction d'ARN sans phénol.... humm pas simple!
Essaye un protocole d'extraction d'ADN classique, lyse avec un détergeant, puis précipitation a l'alcool. Si tu manipules proprement alors tu auras de l'ADN et de l'ARN.

Yoyo

[gorben]

Salut,

Tu peux faire du "hot phenol". Ca marche tres bien.

A+

[invitef7159ceb]

au phenol, je peux car j'en possède au labo.
Je voudrais juste éviter d'avoir à commander du trizol.

Merci pour ces infos,
auriez vous un protocole détaillé svp ?
Je vous remercie

[A voir en vidéo sur Futura]

[kamor]

Ah mais on peut fabriquer son Trizol. Et tu le devras si tu veux faire une extraction phénol Chloroforme.
Tu peux regarder l'article original sur Pubmed PMID: 2440339

[Flyingbike]

Dans le molecular cloning, il y a un protocole pour des extractions d'ARN a base de thiocyanate de guanidine et phénol. Un genre de trizol maison quoi...

[kamor]

Faut pas oublier le chloroforme.
J'ai fait des extractions d'ARN "dans ma jeunesse" avec du phénol Chloroforme-alcool isoamylique mélange 1/1 et ça marchait très bien. Problème c'est long, assez lourd et les quantités récupérées sont certes impressionnantes mais pas reproductibles.

On rajoutait de thyo, c'était déjà assez toxique comme cela, et son efficacité m'a toujours paru assez relative

[Yoyo]

salut

les proportions phenol/chloro/iso sont 4/5/1
Sinon pas besoin de trizol pour faire une extraction, au phenol ca marche tres bien.

Yoyo

[kamor]

C'est pas plutôt 25/24/1 ?
Ca dépend de l'échantillon, si c'est à partir d'une culture de cellules, oui surement, si l'échantillon est complexe, l'utilisation du temps devient utile. Et le nombre de lavages devient important

[gorben]

C'est pas plutôt 25/24/1

En tout cas c'est ce que j'utilise moi aussi.
Important, il faut que le pH du phenol soit acide. Sinon c'est l'ADN que tu purifies

[Yoyo]

C'est pas plutôt 25/24/1 ?
(

Si si tu as raison.

YOyo