Bonjour,
Je ne comprends pas tres bien la technique d'hybridation in situ, pour observer si un mRNA particulier est exprimé au sein d'un tissu ou d'une cellule, il faut bien faire "éclater" les cellules. Et parfois on nous dit que ça nous permet de voir quelles cellules ont intégré un transgène par exemple et de les sélectionner... mais si les cellules sont éclatées on peut pas s'en resservir...
Je ne sais pas si j'ai été très clair, ce que je sais c'est que j'ai rien compris!
Salut!
L'hybridation in situ se fait effectivement sur des cellules mortes, sur lame, car il faut perméabiliser la membrane pour pouvoir faire rentrer les sondes... Les sondes sont des ARN complémentaires de ton ARN cible, couplées à un fluorophore par exemple, ou alors c'est des sondes chaudes (radioactives)! Ensuite tu détectes tes sondes dans ta cellules pour savoir si ton mRNA cible est présent et donc si le gène correspondant est exprimé ou pas.
A+
Vinc
Primum non nocere.
dans des cellules en culture rien n'empeche de faire un duplicate de la boite pour faire le test.
Sinon on peut jouer avec la fluorescence ou la radioac' effectivement mais on peut aussi jouer comme ca:
On incorpore dans la sonde des UTP-dig. On revele ensuite avec un anticorps primaire anti-dig puis un anticorps secondaire couplé à la peroxydase. Enfin on ajoute au milieu deux reactifs (dont je vous eparge les noms complets) NBT et BCIP. Le produit de réaction est bleu/violet.
Merci pour vos réponses!
