ADN: transcription, traduction et biotechnologie

[-Valerie]

Bonjour,

1) j'ai un problème avec le rôle de la télomérase dans la réplication de l'ADN.
À la fin de la réplication chez les eucaryotes il y a un problème avec les extrémités
des chromosomes. En effet, les derniers bouts du brin retardé ne peuvent pas être transcrits
et pour empêcher la dégradation de ceux-ci la télomérase prolonge les extrémités, mais
quand elle a fini à prolonger le brin, je me demande si à la fin il ne reste pas désormais
le même problème et les bouts ne peuvent être répliqués?

2) je n'ai pas compris comment é l'aide d'une succession de délétions à partir de l'extrémité
5' des gènes, on peut analyser les régions régulatrices. Les gènes sont pourtant transcrits
de 3' à 5' et les régions régulatrices se trouvent au début des gènes... Comment la transcription
peut alors être supprimer en enlevant des bouts à partir de 5'?

3) La partie complémentaire à lin-4 de lin-14 suffit-elle pour réprimer la transcription de n'importe
quel gène, si on la transfère tout près de celui-ci?

4) http://books.google.fr/books?id=RHCN...ulaire&f=false

p.331 de ce livre figure 17.3

on veut donc finalement identifier parmi toutes les bactéries, lesquelles ont un plasmide dans
lequel l'ADN qu'on vient d'insérer est en effet présent, mais si on l'introduit in vitro on sait
dans lesquelles on a injecté le gène. Ou est-ce qu'on ne peut pas prouver que cela a bien marché
et c'est pourquoi on regarde si on a supprimé l'action du gène lacZ.

5) Ma dernière question: j'ai un problème avec les empreintes génétiques. Pour le même link que pour la
question 4 p.336 de ce livre figure 17.9

je ne comprends pas vraiment comment on a réalisé ces deux profils et pourquoi on en a réalisé deux.
Après l'électrophorèse en gel, on a ajouté des sondes et comparé les séquences des fragments d'ADN
complémentaires à celle-ci, mais je ne comprends pourtant pas cette image...

Merci beaucoup d'avance
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[Taz_79]

Salut,

Pour ton problème 2 je crois que la transcription de 3' vers 5' n'existe pas c'est de 5' vers 3'. D'où en supprimant la région 5' du gène tu supprimes la séquence promotrice contenant la TATA box (classiquement) pour la fixation des facteurs généraux de la transcription et de l'ARN polymérase II ainsi que des éléments CIS modulateurs pour réguler la transcription.

Pour ton problème 4 après avoir inséré ton insert dans le vecteur ensuite tu fais une banque en transfectant ton vecteur dans les bactéries. Puisque les bactéries se multiplient échangent des info, tu ne sais pas quelles bactéries ont intégré ton vecteur avec ton insert et si ton insert est bien présent dans ton vecteur. D'où le test blanc-bleu avec le gène LacZ (dans le vecteur) qui te permettras de cribler ta banque. Ton insert est inséré dans la séquence de LacZ du coup LacZ est non fonctionnelle et donc pas de synthèse de B-galactosidase et donc normalement en présence de X-gal + IPTG ta colonie est blanche. Si ta bactérie a le vecteur mais sans l'insert, elle a pu se développer puisque dans l'insert elle a un gène de résistance à un antibiotique (ampicilline ou autre) donc du coup elle sera bleu puisqu'elle aura synthétisée la B-galactosidase. Et enfin si ta bactérie n'a pas l'insert elle n'a pas pu se développer.

Quand aux autres problèmes je ne peux pas t'aider. Néanmoins ce que je sais pour ton problème 1 c'est que les séquence des télomères diminuent à chaque réplication puisqu'il faut un 3' saillant. La télomérase est une enzyme utilisée pour le rallongement des télomères, activée pour les cellules souches mais pas pour les cellules somatiques. Si elle est activée pour les cellules somatiques elle est responsable de l'immortalisation des cellules conduisant ainsi à des cellules tumorales.

Je ne sais pas si ça t'aideras. A+

[-Valerie]

Bonjour,

d'accord je crois que j'ai compris maintenant la question 4.

Pourtant j'ai cru que le brin d'ADN est transcrit de 3' vers 5', car les polymérases
ne peuvent fonctionner seulement de 5' à 3'.... Donc elles ajoutent toujours des
bases 3' sur le brin antisens de l'ADN qui va de 3' à 5'?

Merci en tout cas pour les réponses

[Taz_79]

Excuse moi mais je me suis trompée pour la transcription. La polymérase transcrit bien de 3' vers 5' ce qui fait que l'on a une ARNm qui va de 5' vers 3'.
Regarde ce site il peut t'aider : http://www.snv.jussieu.fr/vie/dossie...nscription.htm
La polymérase c'est une très grosse protéine composée de plusieurs sous-unités, la sous unité catalytique va transcrire de 3' vers 5'.
Lorsque l'on mute la partie en 5' des gènes, on va muter la séquence promotrice. Du moment où tu mute cette séquence tu impactera forcément sur l'activité de la polymérase et donc sur la transcription.

[A voir en vidéo sur Futura]

[Taz_79]

Ce qui va être important aussi c'est où se situe ton promoteur. Si il est sur le brin du dessus ou du dessous. Car ça indiquera quel brin sera codant (5' vers 3') et l'autre brin non codant (3' vers 5'). Le brin codant étant la séquence qui donnera directement ta séquence protéique et le brin non codant qui sera lu par l'ARN polymérase.