QCM - Immunoprécipitation

[greg3838]

Bonjour,

j'ouvre un post au sujet d'un QCM dont j'ai la correction mais que je n'arrive pas à comprendre.
Le QCM est le suivant :

La protéine A fait 2kDa, la protéine B 3kDa, la protéine C 1kDa. Ces 3 protéines peuvent s'associer entre elles dans des complexes multimoléculaires.
Elles s'expriment toutes les 3 dans la lignée cellulaire A431.

L'immunoprécipitation de A dans les cellules A431 est réalisée :
A-Après migration en gel non dénaturant, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 2kDa.
B-Après migration en gel non dénaturant, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 6kDa.
C-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine B dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A au poids moléculaire de 5kDa.
D-Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine C dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A.

La réponse est BD. Pour moi, c'est juste B et je ne comprends pas pourquoi D est juste.
Avez-vous une explication qui puisse m'aider à comprendre ?

Je vous remercie de votre aide,

Bonne soirée
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[Guillaume69]

Salut,

Si tu as compris le principe de l'IP tu devrais comprendre...

Que se passe t-il lors de l'IP ? Que se passe t-il ensuite après traitement/migration par SDS-PAGE ?

[greg3838]

En fait, pour moi D est faux car la migration en SDS-PAGE est dénaturante et qu'on aura donc plus de complexes multimoléculaires.
A partir de là, on ne pourrait pas identifier la protéine C dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A puisqu'il n'y aurait plus de complexes formés.

[greg3838]

Personne n'a d'explications ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[greg3838]

Personne ne serait capable de m'indiquer brièvement pourquoi la D est juste ?

[greg3838]

Je vais essayer de tourner mon interrogation d'une autre manière.

D'une façon générale, l'immunoprécipitation à l'aide d'un anticorps est réalisé après dénaturation et transfert sur nitrocellulose ?
Ou bien avant ?

Si c'est réalisé après, ce qui me semble plus logique, je comprends pourquoi D est juste. Sinon cela reste un mystère.

Merci par avance.

[Guillaume69]

Salut,

Je crois que tu n'as pas compris ni le but, ni le principe d'une co-IP.

Le but d'une co-IP, c'est de mettre en évidence une ou des intéractions protéiques :
- Est-ce que A intéragit avec B ?
et/ou
- Est-ce que A et B font partie d'un même complexe protéique ?

Si, comme tu le penses, l'IP est réalisée après dénaturation, alors ton anticorps anti-A ne précipitera que du A ... Ce qui est attendu, et ne donnera absolument aucune information.
Le principe d'une co-IP, c'est de précipiter le protéine A alors qu'elle est encore en intéraction avec ses partenaires, puis de vérifier par western blot si B est présente ou non.

Dans ton cas, A B et C participent à un complexe.
1. Tu dirige un anticorps anti-A => tu précipites l'ensemble des complexes où A est présent (en particuliers ceux où B et C sont présents)
2. Tu dénatures (SDS-PAGE) puis tu fais migrer et tu révèles avec un anticorps anti-C : tu obtiens donc un signal spécifique de C. Si on te le demandais, elle correspondrait au poids moléculaire de C, c'est-à-dire 1kDa. C'est pour ça que la réponse d'avant est fausse (B fait 3 kDa et non 5).

[greg3838]

Bonjour,

merci pour ta réponse.
J'avais bien compris le but, c'est bien pour cette raison que pour moi la réponse D est fausse.

Dans ton cas, A B et C participent à un complexe.
1. Tu dirige un anticorps anti-A => tu précipites l'ensemble des complexes où A est présent (en particuliers ceux où B et C sont présents)
2. Tu dénatures (SDS-PAGE) puis tu fais migrer et tu révèles avec un anticorps anti-C : tu obtiens donc un signal spécifique de C. Si on te le demandais, elle correspondrait au poids moléculaire de C, c'est-à-dire 1kDa. C'est pour ça que la réponse d'avant est fausse (B fait 3 kDa et non 5).

Donc la réponse D est bien fausse comme je le disais dès le départ alors ?
Je rappelle la réponse D :
"Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine C dans les complexes retenus par l'anticorps anti-protéine A."

Après dénaturation, l'anticorps Anti-A n'est plus fixé à A et le complexe est dénaturé.
Donc l'anticorps anti-A ne peut pas identifier la protéine C retenus dans les complexes puisqu'il n'y en a plus après dénaturation.

On revient donc à la question que j'ai posé dès le départ et dont je ne trouve toujours pas d'explications.

J'espère que quelqu'un, et je remercie cette personne par avance, m'apportera une explication au sujet de la réponse D qui selon l'enseignant est correcte.

[Guillaume69]

Salut,

Après dénaturation, l'anticorps Anti-A n'est plus fixé à A et le complexe est dénaturé.

Effectivement. Mais en quoi ça empêcherait de détecter C ?

Donc l'anticorps anti-A ne peut pas identifier la protéine C retenus dans les complexes puisqu'il n'y en a plus après dénaturation.

Mais la réponse D ne dit pas que c'est l'anticorps anti-A qui identifie la protéine C.
Elle dit que les complexes sont retenus (= précipités) par l'anticorps anti A ... Et que comme C fait partie de ce complexe, on l'identifie (sous-entendu, en utilisant un anticorps anti-C qui fonctionne pour western blot ... Pas en utilisant un anticorps anti-A).

[greg3838]

Merci de ta réponse Guillaume69.

J'avais mal compris la formulation de l'item.
Si j'enlève la fin de la réponse D, on aurait : " Après migration en SDS-PAGE et transfert sur nitrocellulose, on identifie la protéine C."

Ce qui est vrai puisque elle ne sera plus complexée, et pourra donc être identifier séparément du complexe.
La fin m'avait perturbé.
A l'avenir, je réfléchirai plus sur le principe que sur la formulation de la réponse.

Merci encore, et bonnes fêtes de fin d'année !

[Guillaume69]

C'est tout le problème avec les QCM ...
Il suffit d'un mot de mal interprété (ça peut être de ta faute mais aussi du prof qui n'est pas forcément un as de la langue française, ou qui simplement ne pense pas à toutes les interprétations possibles de sa phrase ...), et ça t'induit en erreur.

Et parfois certains profs vicieux jouent sur la formulation, donc sur le principe tu as raison d'y faire attention.