cellules nerveuses

Pharmaco · 03/01/2006 - 09h33

Bonjour à tous,
Est ce que quelqu'un a une idée sur les techniques permettant d'isoler les neurones à partir de différentes régions du cerveau ?

Merci d'avance

petter · 03/01/2006 - 12h42

viens chez moi il ne reste plus qu un neurone dans mon cerveau .... ca devrait pas etre trop dur de l isoler......

Pharmaco · 03/01/2006 - 13h03

c'est une bonne proposition mais domage on a besoin de plus qu'un neurone, on cherche l'ensemble cher ami.
tu travailles dans quel domaine?

Jiav · 03/01/2006 - 20h53

Qu'est-ce que tu veux dire par isoler?

Pharmaco · 04/01/2006 - 06h31

Envoyé par Jiav

Qu'est-ce que tu veux dire par isoler?

prendre les neurones qui se trouvent dans une partie de cerveau "Hippocampe, cortex,..." puis étudier l'effet d'une telle substance sur ces neurones.
merci

Glast · 04/01/2006 - 10h46

Si tu veux des neurones de cortex, il suffit de prélever le cortex. Pour l'hippocampe, idem. La sélection des neurones peut se faire simplement par une sélection anatomique. Ensuite le milieu de culture selectionnera le type de cellule qui va survivre in vitro (neurone ou gliale).

Si tu veux des neurones très spécifiques, il y a aussi une solution plus couteuse qui consiste à passer l'extrait tissulaire (après dissociation) sur une colonne à billes couplées avec un anticorps dirigé contre un marqueur spécifique. C'est comme ça que j'isole des cellules ganglionnaires de la rétine, par exemple. Mais quand je fais du cortex ou de l'hippocampe, je ne m'embête pas, je prélève directement la structure.

Jiav · 04/01/2006 - 17h08

Autre solution: appliquer les substances par iontophorèse via une ou des électrode(s) plongées dans le cerveau. Ca évite de tout décortiquer, et on est alors plus proche des conditions réelles puisque les réseaux sont plus ou moins intacts.

Pas vrai Glast?

Glast · 04/01/2006 - 21h26

Tout à fait Jiav. ça dépend juste du type de réponse qu'on espère avoir. Pendant un temps, j'ai également pratiquer la perfusion "push-pull". Il s'agit de descendre par stéréotaxie une canule dans la zone qu'on veut perfuser puis de balancer le produit en douceur. L'avantage, c'est que ça se passe in vivo chez l'animal vigile, ce qui, en terme de physiologie, est quand même très proche des conditions réelles.

Jiav · 04/01/2006 - 21h58

Il manque plus que les tranches: tu coupes au microtome une tranche fine de ce qui t'intéresse et tu le places dans un milieu adéquat (liquide céphalorachidien artificiel, oxygéné et tempér&#233

-plusieurs heures de survie possibles si on se dépêche au moment du prélêvement. L'avantage est de pouvoir faire de l'intracellulaire (si des camions se baladent pas devant le lab) ou de la microscopie photonique confocale (si le lab est riche) dans un système plus normal que des cellules isolées. Inconvénient: on ne peut pas vraiment parler d'animal vigile

On a fait le tour où il y a d'autres méthodes?

Pharmaco · 05/01/2006 - 09h07

Merci de votre réponse, en fait je voudrai passer ces neurones au cytometre donc il faudra les mettre en suspension!!!
je ne veux pas faire de la culture, parce que tout d'abord nous n'avons pas les conditions requises pour la cultures des neurones.
lais par contre est ce que je peux passer par l'étape de la centrifugation pour avoir le précipité ???
qu'est ce que tu pense[B] Jiav

Pharmaco · 05/01/2006 - 09h09

Merci de votre réponse, en fait je voudrai passer ces neurones au cytometre donc il faudra les mettre en suspension!!!
je ne veux pas faire de la culture, parce que tout d'abord nous n'avons pas les conditions requises pour la cultures des neurones.
lais par contre est ce que je peux passer par l'étape de la centrifugation pour avoir le précipité ???
qu'est ce que tu pense[B] Jiav

Glast · 05/01/2006 - 10h26

oui, après l'étape de dissociation enzymatique et mécanique, tu peux centrifuger les cellules (200 g pendant 5 min) pour les récuperer et les resuspendre dans ton milieu.

Pharmaco · 05/01/2006 - 10h47

après le prelevement de cortex par exemple, je le mets directement dans un tube avec du 1X PBS et puis je fais la centrifugation (200g 5min) , une petite filtation pour avoir le surnagent qui va être utilisé comme base pour différentes analyses !!!
après, selon la nature de l'étude souhaitée, je pourrai appliquer le protocole correspondant!
qu'est ce que vous en pensez?

Glast · 05/01/2006 - 17h28

Veille bien à prendre uniquement la couche corticale. Je te conseille de bien déméninger avant. Puis de séparer les 2 hémisphères afin de bien localiser la couche superficielle du cortex.

NB : Dans cette couche tu auras aussi bien des neurones que des cellules gliales.

NB2 : Le PBS te permettra de maintenir tes cellules pendant 30 min. Au dela, elles entreront en ischémie. Si tu as besoin de plus de temps, il vaut mieux un milieu nutritif comme du simple milieu DMEM ou à la limite un tampon salin comme le Hank's devrait faire l'affaire, mais ça ne remplace pas un milieu.

NB3 : Peut être qu'avec un peu plus de précision sur ce que tu souhaites faire, on pourrait mieux te conseiller...

Pharmaco · 06/01/2006 - 08h48

Bonjour, c'est ce que je souhaite faire:
- recuperer le cortex, le mettre dans le PBS, centrifugation (200g, 5 min), recuperer le surnagent, ajouter le produit à tester, analyse au cytomètre.
je cherche à mettre les neurones en suspension pour pouvoir les passer au cytomètre!!!
merci de votre conseil