voie de signalisation intracellulaire

[Eska]

Bonjour,
lorsque que l'on veut démontrer l'implication d'une protéine dans une voie de signalisation intracellulaire en utilisant un inhibiteur protéique de cette protéine, comment fait-on pour faire entrer cet inhibiteur dans la cellule sans la léser?
Merci!!

[Djelaba]

Salut,

Hmmm, je dis peut être une bétise, mais pourquoi vouloir le faire rentrer ?
Il te suffit juste de transformer génétiquement tes cellules, en y introduisant le gène de l'inhibiteur et les séquences nécessaires pour avoir un bon taux de transcription.
Et ta cellule produira directement l'inhibiteur.
Non ?

[Eska]

Ca peut être un moyen mais dans ce cas tu produis des cellules transgéniques qui exprimeront toujours l'inhibiteur or je voudrais pouvoir donner une concentration précise d'inhibiteurs, contre une MAPK par exemple...

[Vinc]

Salut!
Ce qu'on fait en général en transduction c'est qu'on utilise du DMSO (Di méthyl Sulfoxyde) pour solubiliser les inhibiteurs en question et les faire rentrer dans la cellule...
Obtenir des lignée exprimant de manière stable l'inhibiteur ne pose pas de problèmes outre les problèmes classiques de transfection. Mais de toute façon on utiliserai juste une transfection transitoire pour ce type de manip donc les cellules perdraient vite l'expression de l'inhibiteur.
Mais de toute façon cette tactique n'est pas utilisée pour ce genre de chose (ou en tout cas je ne l'ai jamais vu utilisée).

A+
Vinc

[nikaize]

Salut,

Soit tu peux faire un K.O
Soit tu mute le gène sur une zone active .
Mais tu peux utiliser du RNAi pour éteindre ta protéine
Les inhibiteurs surexprimés par un promoteur type Gal ça existe aussi mais faire entrer la protéine, je sais pas si sa existe car il faudrait une quantité de protéine purifié importante et faire entrer tout sa dans chaque cellule ....

[ananda]

Bonjour,
lorsque que l'on veut démontrer l'implication d'une protéine dans une voie de signalisation intracellulaire en utilisant un inhibiteur protéique de cette protéine, comment fait-on pour faire entrer cet inhibiteur dans la cellule sans la léser?
Merci!!

Par micro-injection, c'est possible (sans trop "léser" la cellule ). On peut même micro-injecter dans le cytoplasme ou bien dans le noyau.