Western Blot HIF 1 alpha et HIF 2 alpha

[SelmaB]

Bonjour,

J'ai un petit problème avec mes anticorps HIF 1alpha et HIF 2 alpha. Les 2 ont des poids moléculaire de 120 kDa.
Seulement lorsque je fais mes westernblot j'ai 2 bandes l'une à 50 kDa et une autre à 25kDa pour les 2!

Est ce déjà arrivé à quelqu'un???
Une idée de la cause? Car je ne comprends vraiment pourquoi...

Et c'est des hétérodimères mais je me trouve pas leur poids moléculaire séparemment les connaissez-vous car peut être qu'il reconnaitrait un des dimères...

Merci pour vos réponses

Bonne journée à vous
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[akla]

Bonjour,

Pouvez vous m'en dire plus sur votre expérience (in vitro ou in vivo ; types de tissus ou types cellulaires, méthode d'extraction des protéines), juste pour votre info, HIF-1 et 2 alpha se dégradent très rapidement en milieu non-hypoxique (entre 1 et 5 minutes ).

Cordialement

[SelmaB]

Bonjour,

Désolé pour cette réponse tardive
Donc en fait j'ai fais le western blot sur des tumeurs (manip in vivo) traité avec un antiangiogénique! J'ai lu dans la littérature que le HIF-1 et 2 alpha s'hydrolyse en normoxie mais tout de même dans une tumeur (qui plus est traité avec un antiangiogénique) ca m'étonne...
Est-il possible d'y remédier ou y a t-il une technique plus adapter pour le détecter/quantifier? Un ELISA peut être?

Merci