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transformation e.coli par le plasmide pglo

  1. doudkitty

    Date d'inscription
    février 2014
    Messages
    1

    transformation e.coli par le plasmide pglo

    Bonjour,
    Je narrive pas à calculer l'efficacité de la transformation.. en effet je trouve une conventration de 8.18*10^2 ufc/ml ..
    Or au depart jai ajouté 10microlitre de plasmide pglo dans mon eppendorf ( plasmide pglo lyophilisé 20 micro gramme à reprendre dans 400 microgramme d'eau stérile)..
    Je sais que l'efficacité de la transformation est le nombrd de transformation/micro gramme d'ADN .
    Merci d'avance

    -----

     


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  2. JakiJake

    Date d'inscription
    octobre 2013
    Messages
    37

    Re : transformation e.coli par le plasmide pglo

    Là mon gars on va pas pouvoir t'aider....
    l'efficacité de transfo c'est juste un calcul.

    Tu fais ta transfo (tu la fait bien biensur sinon ça risque pas de marcher) puis tu incube overnight. Et le lendemain tu compte le nombre de colonie positives en fonction de ta selection puis tu calcul la quantité de plasmide que tu a utilisé pour la transfo. Là tu es donc à 0.05µg/µl (puisque j'ai considéré que tes 400µg d'eau stérile c'est enfaite 400µl d'eau stérile LOL) Et donc si ta fait la transfo classique 10µl plasmide + 40µl cellules alors ta étalé 0.5µg de plasmide. Donc si t'a compté 600 colonies admettons, alors l'efficacité c'est: 600/0.5 = 1,2.10^3 ufc/µg ADN. Avec un plasmide controle normalement tu devrais avoir du 10^5 ou 10^6 d’efficacité si tu le fais bien.
     





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