Test immuno-enzymatique... ELISA

[crlng]

Bonsoir ! Comme vous avez pu le voir... le test Elisa me donne du fil à retordre.

Je suis sensé faire un exposé en biotechnologie.
J'ai choisi le thème de la transgénique. Et j'en viens donc à Elisa... (puisque la technique PCR ne va pas être possible...vous imaginez bien )
Je voudrais expliquer comment identifier une protéine d'un aliment génétiquement modifié (je sais pas...la pomme!) avec le test immuno-enzymatique.
Bien entendu, j'ai jeté un oeil à des tas de protocoles mais franchement... Je suis en 1ère et très motivée... Mais ce que je lis, ça ne va pas du tout être possible . Enfin, le vocabulaire et le protocole sont bien trop compliqués pour les autres élèves.
Je voudrais tellement me sortir de là! MAIS CE TEST ME REND FOLLE.
S'il vous plaît, je demande simplement a comprendre clairement (et sans que ce soit trop tiré par les cheveux...) le test ELISA, pour proposer un protocole.

Je vous remercie.
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[pierre.jouenne53]

Bonsoir !

Pour le protocole du test, c'est le suivant :
on fixe l'échantillon - dans lequel on veut savoir si la protéine est présente - sur un support.
On ajoute un anticorps qui se lie spécifiquement à la protéine qu'on veut détecter. Si la protéine est présente, l'anticorps se fixe. Si elle est absente, l'anticorps ne se fixe pas
On rince pour éliminer les anticorps non fixés.
On ajoute un deuxième anticorps qui se lie spécifiquement au premier anticorps. Le deuxième anticorps est marqué par un produit fluorescent, une espèce radioactive, ... On peut aussi lui attacher une enzyme qui transforme un substrat (la molécule qu'on lui donne) en un produit détectable. Si la protéine qu'on veut tester est présente, elle a forcément lié le premier anticorps, et le deuxième anticorps se liera alors au premier anticorps.
On rince une autre fois pour éliminer les anticorps marqueurs qui ne se sont pas fixés.
On met en évidence l'anticorps marqué. Si on le détecte, la protéine est présente. Sinon, elle ne l'est pas. Dans le cas où on a attaché une enzyme au deuxième anticorps, on ajoute le substrat pour voir si la réaction se fait, et ainsi vérifier que l'enzyme est présente.

Tu as plein de variations possibles, pour attacher la protéine à détecter (on peut aussi utiliser des anticorps liés à la plaque de test), pour utiliser un ou deux anticorps (si on n'utilise qu'un anticorps, on attache directement le marqueur à cet anticorps), mais c'est toujours à peu près le même principe. Tu as des animations bien faites sur le net. Par exemple : https://www.youtube.com/watch?v=xxnPR5sy8mg

Dis-moi si j'ai mal expliqué certaines étapes !

@+

Pierre.

[crlng]

Bonsoir !

J'ai parfaitement compris le protocole. Expliqué comme ça, ça paraît tellement évident haha. Mh, mais question par simple curiosité, est-ce qu'il vaudrait mieux utiliser la plaque de test ? Ce serait plus simple peut-être, non ?

Merci beaucoup pour cette explication, et la vidéo (j'aurais dû penser à youtube haha ... )

[pierre.jouenne53]

De quelle plaque de test parles-tu ?
Il me semble en effet qu'il faut un support spécialisé, de manière à ce que la protéine que tu veux tester soit bien accrochée et ne parte pas au rinçage. Mais je ne peux pas te renseigner sur les détails de la manip. Il faudrait que quelqu'un d'autre te renseigne (ou que tu le fasses toi-même !) pour savoir ce qu'il faut employer précisément.

Bonne soirée !
Pierre.

[A voir en vidéo sur Futura]

[crlng]

Je parle de cette plaque.

[pierre.jouenne53]

Oui, j'imagine que c'est la plaque à utiliser (c'est la photo de Wikipedia, si je ne m'abuse ... ^^). Mais je répète que je n'ai jamais fait la manip, donc je ne te renseignerai pas sur les détails de la procédure. Tu pourras demander à ton professeur, à d'autres membres du forum ou chercher par toi-même. Je crois me rappeler que tu peux te faire une bonne idée de l'expérience avec des vidéos Youtube. Les seringues à utiliser ne sont pas habituelles (en tout cas, quand on est au lycée), parce qu'elles permettent d'injecter des anticorps en même temps dans toutes les rangées de puits (plutôt que de devoir remplir un à un les 96 puits ...).

[crlng]

Bonsoir,

D'accord je vais me renseigner pour le reste de mon côté alors. En tout cas, un GRAND merci, encore.