PCR, marqueur biologique

[zeinazeina]

Bonsoir , j'ai une question à propos de PCR.
Comment fonctionne- t -elle?
-----

[NoPainNoGain]

Salut! Bon je vais vous faire la version courte mais si vous voulez la version longue dites le moi.
Version courte:
La PCR Permet l’amplification de multiples copies d’une séquence donnée d’ADN.
C’est une technique enzymatique, cyclique, qui s’appuie sur des variations de température

1. Dénaturation REVERSIBLE de l’ADN par chauffage pour séparer les deux brins ---> 95°C
2. Hybridation des amorces qui encadrent la région que l’on désire amplifier (région d’environ 1*000 bases). Les amorces sont mises en excès ---> 50-60°C
3. Extension des amorces de 5’--->3’ via une ADN polymérase thermostable, ce qui permet de synthétiser un nouveau brin d’ADN artificiel qui sera strictement complémentaire du brin qui a servi de matrice --> 72°C

On utilise une amorce sens 5’-->3’ et une amorce anti-sens 3’-->5’
Ces amorces ne sont pas marquées alors que les sondes sont marquées

A l’issu d’un cycle de PCR, on aura donc doublé le matériel génétique encadré par les amorces
En pratique, on effectue 30 cycles de PCR dont seulement 20 seront efficaces.
On obtient donc 220 copies dont environ 106 copies de la séquence.
Une opération de PCR dure environ 40 minutes

On peut également amplifier de l’ARNm après transformation en ADNc.
On obtient un ADNc amplifié, qui ne contiendra pas d’intron.
On parle alors de RT-PCR.

[zeinazeina]

Merciii bcpp