Probléme de culture cellulaire

[Johan R]

PB050417.jpgP9160454.jpgFlask 3 J2.jpg
Bonjour j'ai un problème de culture cellulaire depuis plusieurs mois.

Certains de mes kératinocytes se rabougrissent sans que je sache pourquoi.
J'ai testé beaucoup de paramètres différents pour trouver d'où ça vient mais je n'ai pas réussi à trouver.

Ca le fait sur tous mes lots de KHN, j'ai testé plusieurs réf de milieux, bien vérifié le CO2 et la température, ca le fait dans les plaques ou dans les flasks et surtout toujours au même endroit dans les contenants.

Si vous avez des idées.

Merci.
Johan R.
-----

[Flyingbike]

est ce que ça l'a toujours fait ?

[Johan R]

Non ça ne le faisait pas avant mais je n'ai rien changé, de visible en tout cas.
Et j'ai testé les mycoplasmes.

[Flyingbike]

le nombre de passages ?

[A voir en vidéo sur Futura]

[minushabens]

bonjour,

je ne peux pas aider ici n'étant pas du métier, mais par curiosité de demande: que faut-il voir sur les images jointes?

[Johan R]

Les cellules normales sont rondes.
Les cellules mortes sont petites.

Ca le fait à tous les passages.
Voir même aprés décongélation et changement de milieux.

[Flyingbike]

Je suis pas sur qu'on ait la même image d'une cellule vivante et en forme et d'une cellule mourante ou crevée. POurriez vous légender vos images selon ce que vous avec l'habitude de voir, de considérer comme OK et ou pas OK ?

Pour moi, dans la première image, en haut on a des cellules confluentes bien adhérentes et prolifératives, et en bas des cellules peu adhérentes/mourantes/...?

[Johan R]

Oui c'est tout à fait ça.

[Tibosax]

Comment ça "toujours au même endroit dans les contenants" ?

Moi ce que ça m'évoque, c'est un défaut du revêtement qui permet l'adhérence des cellules dans ton lot de flasques. Mais si ça se produit aussi avec plaques alors je ne comprends pas.


Sinon, si tu passes celles qui adhèrent et élimine les mortes, ça continue à se produire dans la nouvelle flasque après le passage ?

[Johan R]

Oui c'est ce qu'on pensait mais ça le fait aussi dans les plaques.
Oui ça continue à le faire à chaque passage.

Ben toujours du même coté ou dans le même angle.
Je pense que c'est un défaut de manipulation mais j'ai rien changé et j'arrive pas à le stopper.

[Flyingbike]

ah j'ai eu ce problème avec des cellules primaires : l'incubateur n'était pas plan. Du coup pas assez de milieu d'un coté ou plating non homogène.

A vérifier !

[Johan R]

Je vais tester merci.

[Johan R]

J'ai testé et non les plateaux sont bien plan.

[sebastien_cha]

Tu as vérifié que tu n'a pas un nouveau lot de serum ? Cela apparait-il dans une zone avec une plus grande confluence ?

[Flyingbike]

et faire des photos en 4x pour qu'on y voie plus large

[Tibosax]

Je suis convaincu qu'il s'agit de ça moi aussi...

[Determined]

Bonjour,

As-tu vérifié qu'aucun de tes produits était périmé ? Une amie a eu un problème similaire et l'un de ses produits n'était plus bon (bien que la date de péremption n'était pas encore passée ..)

Bonne chance

[Johan R]

Ce sont des milieux préfabriqués donc pas ou peu de sérum.
Pour la confluence, non ce n'est pas le cas c'est souvent en bord de flasks ou de plaques.

[Flyingbike]

Sans vue d'ensemble c'est plus compliqué.
À quel moment vous prenez les photos ? Sur des cellules platées depuis combien de temps'?

Quelle est la surface concernée par ces cellules arrondies ? Est ce qu'elles flottent ?