fixation des cellules

[invitecf9d8757]

Bonjour,

Je voudrais savoir ce qui se passe dans les cellules du point de vue chimique lors de leur fixation avec du PFA (paraformaldéhyde) et avec du méthanol

Merci d'avance
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[Vinc]

Salut!
La fixation PAF te créé des liaisons covalentes entre les NH2 de tes protéines. Le méthanol (perso je l'utilise froid, sortit du congélo -20°C) dénature et précipite tes protéines.
J'utilise les 2 méthodes de fixation selon ce que je veux voir et la plupart du temps j'utilise les 2 en parallèle car ils ne me donnent pas les mêmes résusltats...

A+
Vinc

[invite22af4c4d]

La fixation par l'alcool entraine un phénomène de coagulation due a une déshydratation Le problème rencontré dans ce cas est que les lipides et les petites molécules sont extraites et que la déshydratation va modifier la morphologie des cellules et donc cette méthode de fixation es peut propice a l'utilisation pour les colocalisation ou les analyse au confocal.
La méthode de fixation par la formaldéhyde va créer des ponts entre les protéines ce qui permet une conservation de la localisation. De plus les lipides ne sont pas solubilisés. C'est pour cette raison qu'il faut perméabiliser tes membranes avant de faire une manip d'immuno par exempl

Voili voilou tout se que je sais la dessus
Aurel

[invite2a651650]

La méthode de fixation par la formaldéhyde va créer des ponts entre les protéines ce qui permet une conservation de la localisation. De plus les lipides ne sont pas solubilisés. C'est pour cette raison qu'il faut perméabiliser tes membranes avant de faire une manip d'immuno par exempl

Voili voilou tout se que je sais la dessus
Aurel

théoriquement en effet, la fixation par PFA ne perméabilise pas en effet la cellule.
par contre en pratique, c'est pas toujours le cas. Pour s'en rendre compte, il suffit de faire un marquage actine après fixation PFA et SANS perméabilisation.
parfois on a un joli marquage.
tout dépend du type cellulaire

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitecf9d8757]

Merci beaucoup pour vos réponses

[Antenapedia]

Bonjour,
Même si la discussion date un peu je pense que ma question y a sa place
Je voulais savoir si la fixation au PFA pouvait entrainer un phénomène de nécrose cellulaire ou du moins l'amplifier ? J'utilise des cellules légèrement fragilisées avant l'expérience, mais j'observe ensuite une nécrose importante et quasi totale au confocal. Est-ce possible que la fixation au PFA soit à l'origine de ce phénomène ?
Merci d'avance,

[Meriem mery]

Bonjour. Je peux savoir la quantité de paraformaldéhyde utilisée pour la fixation des tissus ( gonades ...) pour étude ultérieure d'histologie. Et qu'elle est la durée de conservation du paraformaldéhyde??

[Flyingbike]

pour la plupart des applications, le PAF 4% fonctionne bien

Il se conserve mal sauf s'il est stabilisé comme certaines préparations commerciales. Sinon il faut le congeler