Silanisation

[gorben]

Bonjour a tous,

J'ai plusieurs question tres ... chimique (vachement trop pour moi).

Bon je plante le decors, je suis biologiste a la base et je bosse dans un labo de... biologie !
Je souhaite fixer des proteines sur du verre, tout en conservant l'aspect transparent du verre (c'est pour les regarder au microscope).
Apres des recherches sur internet, j'ai vu que je pouvais silaniser le verre par traitement : / debut silanisation
- 30 min HCl/methanol 1:1
- lavage eau
- 30 min H₂SO₄
- lavage eau
- bouillir 30 min eau
Ensuite, je vous le fais en anglais parce que j'ai du mal a tout comprendre :
- "In a glove bag under an inert atmosphere, the cover slip was placed in a 2% solution of MDS or MTS in dry toluene for 2h.
- lavage au dry toluene

/fin silanisation

Ensuite, fixation d'un crosslinker GMBS puis fixation de ma proteine...

Mes questions sont donc : Qu'est ce que le "glove bag under inert atmosphere"? Est ce que ce genre de manip requiert un labo de chimie specifique, ou peut se faire dans un labo de bio sous une hotte chimique?

Avez vous une meilleure idee pour fixer des proteines sur une plaque de verre (non toxique evidement, le but est de suivre une activite biologique).

Merci pour vos reponses !
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[Fajan]

voila : http://www.sigmaaldrich.com/Area_of_..._AtmosBag.html

Si tu as une étuve sous vide hermétique il y a moyen de faire plus simple. Jadis quand je devais avoir de la verrerie hydrophobe, je mettais mes trucs dans une étuve avec dedans un petit becher de TMSCl. Ensuite je faisais un vide modéré dans l'étuve pendant quelques heures et la verrerie sortait nickel.

[gorben]

Salut,

Merci pour ta reponse. Je ne peux pas utiliser ta methode, d'une je n'ai pas acces a un incubateur sous vide, et de deux si j'adsorbe des proteines sur une surface trop hydrophobes, je les denatures ;(

Par contre je ne savais pas que ces "bags" existaient... Donc la phrase "glove bag under inert atmosphere" refere a ce type d'equipement, exact?

Encore quelques petites questions vu que je ne comprend pas bien quel est l'interet de ce type d'equipement dans mon cas. Prevenir une contamination par un produit ultra toxique de ma manip? lequel?
Travailler sous vide, c'est ca l'"inert atmosphere"? Et dans ce cas, le sac m'a l'air plutot mou pour y faire du vide avec une vacuum non?

Merci
A+

[moco]

Glove box désigne tout simplement une boîte à gants.
Inert atmosphère indique une atmosphère inerte, donc sans molécules O₂. En général on entend par lè une atmosphère d'azote N₂.

Une boîte à gants est une grosse boîte en plastique transparent ou en verre, munie de deux trous circulaires assez gros pour y passer les deux bras. Avant son usage, on y introduit des gants de façon que la partie externe du gant, donc opposée aux doigts, soit fixée aux bords des deux trous de manière étanche. A part cela il circule un courant de gaz azote N₂ dans la dite boîte. On introduit les produits à manipuler par une porte latérale.

C'est très pratique pour manipuler avec des substances sensibles à l'oxygène de l'air, ou des substances dont on veut éviter qu'elles ne se répandent dans l'atmosphère du laboratoire.

[A voir en vidéo sur Futura]

[gorben]

ok j'ai compris !!!!

Merci beaucoup pour vos reponses, je reviendrais si j'ai de nouveaux problemes !!!

A+

[Chalco]

Un glove bag est un "sac à gants", une sorte d'outre avec des gants, avec un large orifice que l'on peut fermer hermétiquement. On met son matériel dedans (par le grand trou !!!) on ferme, on fait passer le gaz inerte un certain temps pour purger de l'humidité. On ouvre alors les flacons qui contiennent des produits qui craignent l'eau.
C'est moins cher qu'une boite à gants et ça s'utilise sur un coin de paillasse

[HarleyApril]

dans le cas présent, l'utilisation de la boîte à gant est pour éviter l'humidité (et non l'oxygène) car les agents de silylation vont réagir avec l'eau
ce qu'on cherche à faire, c'est les faire réagir avec les OH du verre
j'avais fait des silanisations de filtres Whatman et de silices greffées sans utiliser de boîte à gants
par contre, je ne sais pas ce que c'est MDS et MTS et je trouve bizarre de mettre le linker après la silanisation, logiquement, on devrait le mettre avant
en effet, la silanisation bloque tous les OH du verre et il ne reste plus rien pour accrocher
la logique, c'est de fixer le linker sur des OH, puis de bloquer ceux qui restent

bonne continuation

[gorben]

Salut,

En fait le MTS et MDS sont les agents de silylation. Ce sont eux qui vont se fixer sur le OH de la silice via des groupements MeO ou EtO respectivement. Le linker est le GMBS, et il va se fixer sur le groupement CH₂SH de mes MTS ou MDS via un groupement .... bizarre que je suis bien incapable de decrire (GMBS = N-"gamma"-maleimido-butyryloxy succinimide ester).
C'est sur ce linker que je vais ensuite fixer ma proteine.

Ah oui, derniere question... le "dry toluene" et le "toluene anhydrous" c'est la meme chose?

A+

[HarleyApril]

OK, c'est plus clair maintenant
tes thiols vont s'additionner sur le maléimide du linker aminobutyrique
ta protéine s'accrochera par sa partie N terminale à l'ester activé (succinimidoxy)


le dry toluene et l'anhydrous, c'est bien la même chose, c'est du sec (car l'eau est à éviter)