Tampon en HPLC
Bonjour ,
je doit effectuer des anlyses en HPLC et l'on me demande de mettre en phases mobiles de l'acetonitrile et un tampon phosphate à pH= 6.8 je voudrais savoir si quelqu'un pouvait m'expliquer le role d'un pH aussi pres de celui de l'eau et si il y a vraiment une utilité a uiliser unt el tampon qui bouche tres rapidement les colonnes
merci d'avance
Bonjour
le rôle d'un tampon est de maintenir un pH constant indépendamment de ce qu'il y a en solution (il y a toujours des limites à ce qu'on peut mettre, bien évidemment)
cordialement
Bonjour,
Donc comme il a été dit le rôle du tampon va être de maintenir un pH constant, rôle que ne pourrait pas tenir l'eau pure par exemple.
Si on tient à ce que le pH soit constant c'est que les molécules analysées doivent être ionisables et ce degré d'ionisation est fonction du pH de la solution. Le pH de 6,8 a donc surement été choisi car c'est celui qui va fournir les meilleurs interactions entre tes molécules et la colonne afin d'obtenir la meilleur séparation dans le temps le plus rapide.
En ce qui concerne la colonne, elle ne se bouchera pas si tu prend bien soins de la rincer après analyse.
Bonjour,
tout d'abord merci d'avoir repondu ça m'a bien aidé; effectivement je dois séparer des glycoprotéines ( lectines pour être précise) donc le PH doit avoir son importance.
Le seul problème c'est que même en filtrant ma phase mobile avant chaque utilisation en faisant suivre chaque analyse par 2 rinçages différents et chaque matin une purge totale des voies cela n'est pas suffisant j'ai déja changer 4 fois de précolonne et ruiné une colonne à cause du tampon ( autant vous dire que ca revient vite cher)
Donc si vous avez une solution pour remplacer ce tampon je suis preneuse !!
En tout cas merci pour vos renseignements
Bonsoir.
Peut être que ton tampon précipite lorsque tu le mélange avec un trop grand pourcentage d'acétonitrile. Attention a toujours passer de l'eau entre un 100% tampon et un 100% solvant organique.
Quelle est la concentration du tampon. Tu peux essayer de la diminuer.
Si tu travaille avec un gradient evite de finir par un trop grand pourcentage de solvant organique, quitte à ralonger la durée d'analyse.
Bonjour
il y a un test simple à faire avec le tampon.
Dans un becher mélanger le tampon avec l'acetonitrile à la plus forte concentration d'acetonitrile utilisée (fin de gradient le cas échéant) attendre quelques minute et verifier si la solution reste limpide.
Si il y a le moindre trouble on ne peut pas travailler à cette concentration de sel.
Il est possible de diminuer la concentration en phosphate dans le tampon en restant au même pH ( ajuster le cas échéant au pH-metre).
