Effet acide ascorbique

[Minialoe67]

Bonsoir

J'ai étudié l'effet inhibiteur de l'acide ascorbique:
Dans le premix 1: D-Glucose + eau + Glucose oxydase + HRP + TMB
Dans le premix 2: D-Glucose + eau + GOx + HRP + TMB + acide ascorbique

On a étudié la réaction a différents temps (arrêt de la réaction par H2SO4 puis passage par spectrophotomètre). On a relevé l'absorbance. J'ai ensuite tracé les graphes.
Capture d’écran 2015-05-20 à 10.11.10.pngCapture d’écran 2015-05-20 à 10.11.20.png
Premix 1: je ne comprend pas du tout ce qui se passe... Sans inhibiteur, pourquoi l'absorbance s'annule au bout d'un moment? Normalement il devrait y avoir une coloration tout le temps, non?
Premix 2: j'ai des points erronés je pense (1min, 15 min)? En fait, au bout de 10 min, tout l'acide ascorbique a réagit (avec H2O2 produit par la réaction avec la GOx) donc le couplage enzymatique Glucose-Gox-HRP-TMB peut reprendre et la solution se colore de nouveau, d'où une absorbance non nulle. Est ce cohérent?

(je sais je vous donne pas les concentrations, mais j'aimerais juste connaitre les effets qui ont lieu)
Merci!
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[moco]

Qu'et-ce que tu appelles HRP et TMB ? Est-ce que ce sont des colorants ? Des indicateurs ?
A quelle longueur d'onde travailles-tu ? Dans le visible ? Quelle est la substance qui absorbe la lumière ?

[Minialoe67]

HRP: peroxydase de raifort (enzyme)
TMB: Tétraméthylbenzidine
Longueur d'onde: nos solutions sont jaunes, on travaille donc vers 450 nm
C'est le TMB qui donne la coloration: bleu quand il s'oxyde, mais vu qu'on stoppe la réaction aux différents temps avec H2S04, les solutions deviennent jaunes