Bonjour à tous,
Je travaille sur un modèle de souris qui a une mutation sur un gène (déletion de 1757pb). Je fait des PCR multiplexes sur les queues des souris pour les génotyper et savoir lesquelles sont mutées, hétérozygotes ou sauvages.

J'utilise 3 amorces:
- 1 sens en amont de le mutation
- 1 antisens dans la déletion
- 1 antisens en aval de la mutation

Donc quand tout va bien, j'ai 3 résultats possibles:
-2 bandes (à 417 et 497pb)= hétérozygote
-1 bande à 417pb = sauvage
-1 bande à 497pb = mutée

Seulement depuis quelques temps je n'obtiens qu'une seule bande voir aucune. J'ai recommandé des amorces, j'ai changé de kit pour la PCR, j'ai testé différents protocoles de digestion des queues et ça n'a rien changé.
Je ne comprends vraiment pas pourquoi ça ne marche plus comme ça du jour au lendemain, est-ce que quelqu'un aurait une idée????
Merci d'avance


Et bravo pour ce forum, il est vraiment génial!!!