Salut à tous !
Bon pour changer un peu de la signalisation cellulaire et de la cancéro, je vous ai cette fois ci préparé un petit "jeu"de génie génétique qu va nous permettre de comprendre (ou de réviser
) le principe de production d’une lignée de souris KO (dans les grandes lignes).
Comme d’hab, il y a quelques questions peut-être un peu ardues mais bon…. Les 2 parties sont indépendantes (la première se faisant très rapidement et facilement car c’est du cours bête et méchant) et les questions sont en italique.
I°) Questions de cours : généralité sur les manipulations génétiques
1) Qu’est ce qu’une transformation en génie génétique ? Et une transfection ?
2) Le système LacZ est souvent utilisé en tant que système rapporteur en biologie moléculaire.
Décrivez le principe de fonctionnement d’un système rapporteur et plus précisément celui du système LacZ. En connaisez vous d’autres ?
II°) Syndrome de Coffin-Lowry et lignée KO
Le Syndrome de Coffin Lowry (CLS) est dû à des mutations dans le gène RSK2, qui code pour une Serine/Thréonine kinase, notamment impliquée dans le développement cérébral et osseux.
Afin d’étudier la relation génotype/phénotype chez les patients atteints du CLS, une équipe a décidé de construire une lignée de souris KO pour le gène RSK2.
1) Rappelez rapidement ce qu’est une lignée KO ?
2) Le gène RSK2 est divisé en 22 éxons. Les chercheurs ont donc réalisé la construction génétique suivante, « in vitro » :
(shéma en bas du message)
Sur quel processus génétique classique est basée l’élaboration de cette lignée KO ? A quoi sert la cassette Néo et que doit –elle contenir outre la séquence codant pour la résistance à la Néomycine ?
A quoi sert la séquence codant pour la thymidine kinase et pourquoi les chercheurs l’ont-ils placé juste après l’exon 22 ?
3) La construction présentée dans la question précédente a été transfectée dans des cellules ES murines. Ces cellules ont ensuite été sélectionnées grâce à l’ajout, dans le milieu, de gancyclovir et d’une autre molécule.
Qu’est ce qu’une cellule ES ? D’après la question II°)2), quelle est l’autre molécule introduite dans le milieu ? Qu’est ce que le gancyclovir et quel est son mode d’action ?
4) Les cellules sélectionnées sont ensuite introduites par micro injection dans un blastocyste de souris, puis les embryons sont réimplantés dans des mères porteuses.
Quelle va être la nature génétique des souriceaux qui vont naître ?
5) Les chercheurs ont ensuite croisés ces souriceaux pour obtenir des individus F1.
Sachant que les F1 obtenues sont RSK2 +/-, que peut-on dire quant à la colonisation des territoires embryonnaires par les cellules ES RSK2 +/- transfectées, chez les parents de ces F1 ?
6) L’équipe a finalement réussit à « produire » des individus homozygotes femelles RSK2 -/- par croisement des F1.
Sachant que le gène RSK2 est situé sur le chromosome X, était il nécessaire de refaire un croisement pour obtenir des homozygotes chez les individus mâles ?
7) L’étude du rôle physiologique de RSK2 « in vivo » chez ces souris KO a été possible car le gène RSK2 n’est pas un « gène essentiel ».
Qu’est ce qu’un « gène essentiel » ? Que se serait-il passé si RSK2 avait été un gène essentiel ? Dans ce dernier cas, quelle stratégie auriez vous envisagé pour obtenir des individus adultes mutés pour un gène essentiel ?
Voili voilou !
Bon courage à tous, ce n’est pas très difficile
A+
Vinc
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Re : [Bio] [L2/M1] Génie génétique et souris KO.
Envoyé par Vinc 
