transformation levures

[invite3d0376e4]

Bonjour à tous!
J'ai une petite question, j'a réalisé une transformation de levures avec la méthode du LiAc. A la fin il faut réaliser une choc thermique en passant les tubes 30 min à 30°C puis à nouveau 30 min à 42°C. Seulement ayant eu la tête en l'air j'ai d'abord mis mes tubes une demi-heure à 42°C... Du coup je les ai remis à 30°C et j'ai refait un passage à 42°C, Pensez vous que cette transfo puisse encore fonctionner?
Merci d'avance
-----

[piwi]

Je dirais oui. Mais les transformations de levures sont tellement difficiles....
J'irais même jusqu'a dire que si cela ne marche pas vous ne pourrez pas pour autant incriminer cette négligeance

Cordialement,
piwi

[invite3d0376e4]

Merci!
Mais ne me dites pas que les transfo de levures sont tellement difficiles! Je commence ma thèse dans 2 mois en utilisant cette méthode...

[invite433fc27f]

dsl de faire le débile mais comment on fait pour faire un dossier ou l'on pose notre problème...? J'aurais des quesitons concernant la physique des ondes sonores. Merci bcp !

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3d0376e4]

Bonjour,
Alors normalement quand tu es dans la page d'acceuil des sujets en haut à gauche tu as une icône qui indique "nouveau". Tu clique dessus et c'est bon

[piwi]

Ben une transformation c'est pas une transfo de bactérie. Les rendements sont nettement moins bons.
M'enfin, je pense que ceux qui pratiquent cela en routine s'en accomodent et arrivent très bien à travailler.

Je me suis occupé recemment d'un TP où les étudiants faisaient une transfo de levure et sur 24 tentatives toutes ont échouées (les conditions etaient mauvaises). C'est certain que cela n'arrive pas avec les bactos. Les choses sont plus sensibles manifestement, mais vous vous ferez la main

[invite3d0376e4]

Vous réaliser des TP de génet ou autre à strasbourg pour réaliser des transfo de levures? J'ai fais toute mon parcours de fac à strasbourg....

[piwi]

Ben je l'ai fais cette année pour des licences SVT ( normalement des personnes s'orientant vers le capes, mais pas toutes loin s'en faut).

Donc si vous etiez là au mois de novembre, on se connait

Cordialement,
piwi

[Yoyo]

salut

Oui ca devrait pas poser de probleme, meme 3/4 d'heure a 42°C ce qui est sur en revanche est que l'efficacité est moins bonne.

Sinon la transfo de levure marche tres bien, a la condition importante que la culture n'ait pas trop poussée, sinon c'est foutu! (faut pas depasser 1,5 de DO a 600nm)
Souvent on a meme trop de colonies sur le boite
La pureté de l'ADN joue aussi un role, et il ne faut pas oublié l'ADN entraineur.
Ah oui j'oubliai un truc important, quand les levures sont en LiAc elles sont fragiles, donc eviter les centrifugations trop longues et trop fortes, sinon tout est mort! Il faut aussi eviter les pipetages intenpestifs car le passage dans le cone est une etape delicate.

Voila pour les quelques conseils.
YOyo

[invitefe7212d1]

Coucou

Lors de mon M1 j'ai laissé mes levures à 42°C pendant 3/4h au lieu de 1/4h et ça a marché! Bon d'accord j'avais moins de clones sur boîtes mais ça a marché!! donc tu devrais quand même t'en sortir je pense

Sinon je dirais comme Yoyo, la transformations de levures par LiAC n'est pas compliquée et donne un bon rendement si tu tiens compte des conseils de Yoyo

Et même en faisant de petites erreurs on peut s'en sortir...vous pouvez me croire

Lilie

[invite3d0376e4]

Bonjour tout le monde!
Eh bien oui ma transfo de levure a marché!! je viens d'aller voir, je n'ai pas encore calculeéle rendement mais je vous tiendrai au courant!

Sinon pour piwi, non pour moi la licence c'était il y a 3 ans...Donc on n'a pas dû se croiser