système Cre-ER(T2)

[inviteabceedf5]

Salut!

J'ai entendu parler de la protéine de fusion Cre-ER(T2), ça a l'air super (inductible...) mais quelles sont les limites de ce système? C pas possible que ça soit parfait! Merci d'avance pour toutes les réponses.
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[invite191f8f85]

Hello,
Tout n'est qu'une question de "promoteur" ! En plus claire, le promoteur qui sera utilisé pour conduire l'expression de ta fusion Cre-ER peut etre constitutif, dans ce cas Cre-ER sera exprimé dans tous les tissus mais défloxera que si l'animal recoit l'agoniste de ER; ou bien le promoteur est "tissu-spécifique" et c'est là ou les choses se compliquent car en réalité il faut parler de promoteur "tissu-sélectif" et non plus de tissu-spécificité. En plus claire, un promoteur qui est censé entrainé l'expression du transgene dans le muscle squelettique uniquement (car c'est ce qu'il fait naturellement lorsqu'il est dans le genome à "son" locus), présentera des fuites transcriptionelles plus ou moins négligeable cad suivit ou non de la synthese de Cre-ER (ou de tout autre transgene). Ces "fuites" peuvent compliquer l'interpretation des résultats si l'on veut étudier l'animal de façon intégré (cad dans son ensemble).
Autre désavantage que je voit à ce systeme, bien qu'il soit assez efficasse d'apres ce que j'en ai lu dans la litterature, est que l'administration de toute molecule ayant une affinité pour ER pourrait avoir des effet secondaires, ce qui compliquerait encore l'interpretation.
J'espere que j'ai pas été trop confus dans mes explications.
By

[invited8287251]

Si vc'est le syqtème mis au point au labo Chambon par Norbert Ghuiselynck, le LBD (domaine de liaison du récepteur)du récepteur qui est fusionné a la protéine cre possède une mutation qui le rend "insensible"aux steroïdes endogènes mais qui permet son activation par un agoniste. L'une des difficultés est de savoir dans qeul tissu a eu lieu la recombinaison et pour cela le systeme a été amélioré recemment avec une astuce permettant de visualiser une activité béta gal dans les cellules où la recombinaison a eu lieu.