Peripheral Blood Mononuclear Cell

[invitea4f9d201]

Bonjour,
Quelqu'un aurait il un protocole d'isolation/récupération des " Peripheral Blood Mononuclear Cell " (PBMC) chez le rat s'il vous plaît ?

je vous remercie.
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[invite9eab997a]

Salut,

moi je faisias comme ça:

récupérer le sang dans des tubes EDTA
diluer le sang au 1/2 dans du PBS
utiliser un volume de ficoll pour 2 volumes de sang dilué
Centrifuger 20 min 1800 rpm à température ambiante
récupérer l'anneau de cellules à l'interface entre le ficoll et le sérum

NB: s'il reste beaucoup de globules rouges dans tes PBMC tu peux ensuite faire une lyse rapide.

[invitea4f9d201]

Merci.
Est il possible de faire directement derrière une extraction d'ARN au trizol ?

[invite9eab997a]

Oui bien sur.
C'est pour ça qu'il ne faut pas utiliser de tube hépariné car il semble que ça induit une inhibition de la Taq si tu fais une PCR derrière.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite84b0382c]

Bonjour,

Petite remarque rapide: attention lorsque tu prélèves ton anneau (il est relativement mince) à ne pas prélever trop de phycoll. Certe ta centrifugation d'après va te permettre de t'en débarasser mais bon ... les cellules n'en sont pas fans

Akïn