Comment analyser les résultats de PCR quantitative???

[invite853321bf]

Oui, LXR les courbes situés tout en bas sont mon négatif et des puits où il n'y a eu aucune amplification.
Mon problème se situe plus sur les pics que l'on peut observer mais qui ne dépasse pas le seuil
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[piwi]

Ben oui, j'ai des courbes de fusions pour chacun des gènes que j'étudie (en Sybrgreen). Passé 40 cycles ce n'est plus au top évidemment mais encore une fois, il ne faut pas le bébé avec l'eau du bain.

piwi

[invite21bf223f]

Bonjour,
je souhaiterais avoir votre avis sur la méthode qPCR (relative ou absolue) que je pourrais utiliser pour mes analyses.
dans le labo ou je viens de débarquer, on me demande de quantifier l'expression d'un gène viral (virus à ARN) en qPCR, il semblerait que la meilleure méthode pour ça c'est la qPCR absolue qui permettrait d'avoir le nombre de copie exacte du gène dans le génome du virus afin de comparer ces résultats au nombre de particules virales derrière. donc ma question est la suivante: vue que c'est un virus à ARN, faut-il cloner le gène dans plasmide et réaliser un courbe de dilution ? ou bien existe-il une autre méthode ?? si parmi vous une personne a eu a faire un travail similaire, je suis ouvert à toutes vos suggestions ?? et enfin, est ce que quelqu'un parmi vous disposerait d'un protocole à suivre afin de réaliser cette quantification??
cordialement

[invite1ffb2512]

coucou ,

je dois quantifié l'expression d'un gène et pour ça j'utilise la méthode des DDCt ( quantif relative , PCR en temps réel). quelqu'un pourrait m'expliquer ce qu'est le DDCt ? s'il vous plait

[Flyingbike]

plutôt ∆∆Ct

On compare des expressions de gènes d'après les valeurs obtenues à partir de la différence entre les différences (de Ct entre une cible et un rapporteur pour une condition 1) et les différences (de Ct entre une cible et un rapporteur pour une condition 2)

[invite1ffb2512]

d'accord merci sauriez-vous s'il vous plait m'expliquer de façon simple comment faire une courbe d’efficacité d'une q RT-PCR ? enfin comment évaluer son efficacité , merci

[invite1ffb2512]

Salut ,

je m'excuse pour mon intrusion mais c'est vraiment urgent j'expose mon rapport de stage dans pas longtemps et je ne sais toujours pas si c'est vraiment obligatoire de faire le calcul des D CT pour interprété les resultats d'une q RT-PCR sachant que ce qu'on recherche c'est vraiment la mise au point du protocole et qu'à chaque fois y a un soucis ex : conta des sans RT , de l'eau ..... ma question est donc :

doit-on obligatoirement faire le calcul des D Ct ? est-il suffisant de parler des Ct seulement ?
doit-on obligatoirement dessiner une courbe standard ? sachant qu'au lieu de ça j'ai fait des diagrammes!

merciiiiiiiiiiiiiii de me répondre au plus vite

[invitedb9646bb]

bonsoir.
svp pouvez vous m'envoyer l ppt sur m boite mail j'en ai trop besoin pour mon memoire svp
mrc

[invite8a18ded8]

je voudrais savoir si il est possible de mettre ton exposé pour que je mis inspire car j'ai la même chose.

[Flyingbike]

Bon ça m'agace de voir ce topic déterré sans cesse alors que le lien est dans le texte. Si vous ne le trouvez pas, on peut rien faire de plus pour vous....

Fermeture pour éviter que cela devienne n'importe quoi !