Immuno-marquage

[invitef59a79ea]

bonjour,
j'aimerai comprendre le fonctionnement de l'immuno marquage à l'aide d'explications assez simple.
je vous remercie par avance pour vos réponses.
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[Novocaine]

Salut,
C'est basé sur le système antigène-anticorps. Imaginons qu'on veuille marqué une cellule X qui présente des protéines Y sur la surface. Et bien on va pouvoir utiliser des anticorps de Y qui vont naturellement se fixer dessus..marquant ainsi la cellule X. Les anticorps sont des immunoglobines spécialement sécrétées pour se fixer sur la protéine Y. En fait, dans le système immunitaire c'est un moyen de défense car les anticorps recouvrent complètement un antigène créant un complex qui immobilise celui ci et permet à d'autres cellules de venir manger l'antigène sans difficultés..

Donc on va profiter de cette affinité pour marquer des protéines cibles! Mais pour qu'on puisse voir, on fixe sur les anticorps des marqueurs. Alors ça peut être un marqueur radioactif par exemple, ou un marqueur fluorescent comme ça au microscope on repère bien la protéine cible.

En fait c'est un peu plus compliqué car la protéine Y aura plusieurs épitopes(régions antigèniques) dont elle pourra être marquée par des différents anticorps correspondant à ces différentes régions.Sinon, il existe deux façons pour produire des anticorps contre telle ou telle protéine qu'on veut étudier. Dis moi si tu veux en savoir plus

Pour aider: vois les régions épitopes comme des serrures présentes sur la protéine et les anticorps comme des clés. Si un anticorps correspond à la serrure elle se fixera et la protéine sera marqué.

A+

[invitef59a79ea]

merci pour ta réponse elle etait très claire.
Pourrais-tu m'expliquer les 2 façons différentes dont tu parles s'il te plait?? merci

[Novocaine]

Ok alors la première façon de faire c'est de prendre un lapinou et du lui injecter les protéines qu'on veut marquer. Celà va activer son système immunitaire(de défense) et donc les globules blancs du lapinou vont sécréter des anticorps contre cette protéine. Bah on fait 3 4 injections(en gros) et puis on tue le p'tit lapinou
Un lourd sacrifice qui nous permettra de récupérer son sérum. Le sérum c'est en fait le plasma sanguin sans plaquettes ni cellules. On aura donc juste un plasma sanguin avec les anticorps qu'il nous faut! Voilà, mais en fait, le lapin va sécréter différents anticorps correspondant aux différents épitopes de la protéine. Donc on obtient des anticorps polyclonaux. C'est un mélange d'anticorps qui se fixent à différents épitopes de la protéine.

La deuxième technique un peu plus complexe c'est d'injecter pareil une protéine qu'on veut observer ultérieurement dans une souris. On va là aussi sacrifier la p'tite souris et récupérer des globules blancs responsable de la synthèse d'anticorps(plasmocytes). Mais faut savoir que chaque plasmocyte ne sécrète qu'un seul type d'anticorps. On choisira qu'un seul plasmocyte et on va en faire un hybridome( en gros: hybridation entre une cellule cancéreuse et un plasmocyte). Pourquoi on fait ça? Tout simplement pour rendre le plasmocyte immortel car dans le corps le plasmocyte a une durée de vie très courte(de l'ordre du dixaine de jours si je me rappelle bien mais on s'en fou en fait ) Et donc voilà on a donc une jolie culture de plasmocytes qui sécrètent tous des anticorps contre la protéine qu'on veut observer!!
On obtient ce qu'on appelle des anticorps monoclonaux cette fois!

Voilà maintenant tu sais presque tout sur l'immunomarquage !

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitef59a79ea]

merci beaucoup ca m'a beaucoup appris et j'ai trouvé ca très interressant!!

[invitea945de07]

Bonjour

Pour répondre à la question initiale : "comprendre le fonctionnement de l'immuno marquage à l'aide d'explications assez simple.", je peux suggérer un lien vers notre site internet qui tente de décrire avec simplicité ce qu'est un immuno-marquage.

http://www.histalim.com/pages/fr/immuno-marquages.php