Repiquer des bactéries...

[Clr]

Bonjour,
Je dispose de souches d'E.Coli. Je compte utiliser ces bactéries pour produire de l'hydrogène.
Je voudrais tout d'abord les multiplier en les repiquant. Quelles sont les précautions à prendre lors de cette opération ?
Et quelle est la composition d'un milieu minimum? C'est juste de la gélose ou y a t il un additif ?

Merci.

[Yoyo]

Salut,

Il faut manipuler cela de maniere sterile, sinon tu vas avoir de mauvaises surprises.
Ensuite le milieu de croissance doit contenir du glucose, des acides amines, une source d'azote, des sels.
Mais es tu sur que tu souhaites un milieu minimum? ensuite je vois pas bien comment tu vas produire de l'hydrogene.

Yoyo

[Clr]

En fait, je cherche, dans un premier temps, juste à accroître le nombres de bactéries pour constituer un "stock" utilisable dans plusieurs expériences.
Ensuite, je compte placer des bactéries dans des milieux de compositions nutritives différentes et étudier alors la production d'hydrogène (grace à un montage approprié).

C'est pour ça que je cherche dans quel milieu "minimum" je dois repiquer mes bactéries, uniquement pour qu'elles se multiplient.

"le milieu de croissance doit contenir du glucose, des acides amines, une source d'azote, des sels." Y a t il des proportions à respecter?

Merci.

[John78]

Salut

Coli ne produis pas à ma connaissance d'H2, au mieux certaines souches possédant un plasmide atypique produise de faible quantité d'H2S....

A+
John

[John78]

J'ai peut etre dis une connerie :

http://archquo.nouvelobs.com/cgi/art...setavenir.com/

Mais il ne précise pas quel type d'hydrogène est produis... (H2 ou H2S...)

A+
John

[Yoyo]

par contre d'apres l'article c'est lors de la fermentation anaérobique que E.coli produit de l'hydrogene.
ces conditions ne seront certainement pas simples a mettre en place surtout hors d'un labo equipé pour la culture anaérobique.

POur répondre a Clr, oui y'a des proportions a respecter pour faire le milieu de culture.

Yoyo

[Lord M]

L'enrichissement de E. coli peut se faire sur un milieu très simple, limite même sans milieu du tout. Pour être rigoureux je te propose la formule du bouillon nutritif de base :10g de tryptone, 5g d'extrait de viande, 5g de chlorure de sodium.

Du peptone peut être utilisé à la plce du tryptone, et du lactose à la place du NaCl.

En fait le vrai problème auquel tu vas te heurter va être la séléctivité de ton milieu : sur ce genre de bouillon il pousse tout et n'importe quoi. C'est pour ca qu'il faudra impérativement autoclaver ton milieu avant utilisation, et ensuite l'ensemencer et faire tes prélèvements de manière stérile (au bec bunsen par exemple).

Bonne chance

[Clr]

Eh bien merci beaucoup.
Je vais essayer de cette manière.
Il faut que je vois aussi si je dispose de tout les systèmes pour assurer la stérilité des expériences.

Encore merci.

Claire

[Solène]

Quand à l'anaérobie, je pense qu'une simple jarre anaérobie devrait te suffir...

[Lord M]

Si tu as des problèmes de culture en anaérobiose, ou un manque de production de gaz, essaye avec un milieu lactosé.

[Meningo]

Si tu as des problèmes de culture en anaérobiose, ou un manque de production de gaz, essaye avec un milieu lactosé.

Quel est le rapport entre l'anaérobiose et le milieu lactosé?
Si j'ai bien compris, pour la manip, le but de l'anaérobiose est de produire du H2 : qu'est-ce que le milieu lactosé va apporter?

[Lord M]

Je n'en suis pas sur, mais il est possible que le lactose favorise la fermetation de E. coli, et donc le production de gaz.

Malheureusement je n'ai pas réussi à trouver de biblio sur ce point précis. Je me base sur un catalogue de milieux de culture : le lactose revient souvent dans la composition des milieux pour E.coli. De plus pour deux d'entre eux (bouillon lactosé au BCP et bouillon BLBVB), la production de gaz est un indice de présence des coliformes.

Ref : Biokar Diagnostics Microbiologie

[Meningo]

Etrange.....pour moi E.coli fermente de nombreux sucres (glucose, sorbitol, mannose......et le lactose). Les milieux contenant du lactose ne favorisent pas la fermentation. A l'aide d'un indicateur coloré (BCP) ils permettent juste de savoir si la bactérie utilise le sucre (moyen d'identification, entre autres).

[Solène]

En effet dans la plupartdes milieux de culture pour Enterobactéries, le lactose est présent mais uniquement de différencier les coliformes des non coliformes. Je ne pense pas qu'il soit spélialement mieux assimilé qu'un autre sucre.
Et le milieu BLBVB ne contient que du lactose comme substrat carboné énergétique donc difficile d'en déduire que la fermentation d'un autre sucre ne produirait pas autant de gaz...

[Lord M]

Ouaip, moi aussi ca me parait bizarre. Mais c'est juste un constat après avoir jeté un coup d'oeil sur les milieux de cultures disponibles. En plus ca doit dépendre de la souche utilisé.

Enfin, n'oublions pas que c'était juste une suggestion au cas ou la production de gaz serait très faible avec un milieu classique.