culture cellulaire

[invite75bf7adf]

bonjour à tous,

Je viens de m'inscrire sur ce forum et j'ai déja pu apprendre pas mal de choses, c'est vraiment super!

Seulement voilà, je vais commencer à faire de la culture cellulaire dans le but de les transfecter (cellules HeLa, HEK 293, MEFs) et je n'en pas fait avant.
J'ai lu les autres discussions se rapportant à ce sujet mais ce dont j'aurai besoin c'est vraiment des notions de base concernant la culture cellulaire: par exemple à quelle fréquence faut-il changer le milieu? comment déterminer le pourcentage de FCS à utiliser? à quelle fréquence faut-il les repiquer (est-ce le terme exact d'alleurs?) ? lorsqu'elles sont à 100% de confluence ou avant?

Je sais que ce n'est pas une discussion très intéressante mais j'ai vraiment besoin de conseils. Ce sont des manips importantes pour moi et j'ai pas envie de faire trop de c........!

En tout merci d'avance pour vos réponses. Et si vous connaissez des sites instructifs, je suis preneur!
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[Vinc]

Bonjour!

à quelle fréquence faut-il changer le milieu?

Tout dépend de sa couleur. Si ton milieu devient jaune c'est qu'il s'acidifie car augmentation du nombre de cellules. En général je ne change jamais mon milieu entre deux passages.

comment déterminer le pourcentage de FCS à utiliser?

Là encore tout dépend des cellules mais très générallement on utilise du milieu à 10% de sérum.

à quelle fréquence faut-il les repiquer (est-ce le terme exact d'alleurs?) ? lorsqu'elles sont à 100% de confluence ou avant?

Cela dépend de la vitesse de prolifération de tes cellules : certaines poussent très lentement et d'autres très rapidement. Les HeLa poussent rapidement donc il faut les passer assez souvent. Pour les HEK c'est un tout petit peu plus lent.
Il faut éviter la sur-saturation des boites mais tu peux très bien attendre les 100% de confluence.

Je sais que ce n'est pas une discussion très intéressante mais j'ai vraiment besoin de conseils. Ce sont des manips importantes pour moi et j'ai pas envie de faire trop de c........!

Ne t'en fais pas! Ce ne sont pas des manipes très compliquées. Elles doivent être exécutées rigoureusement mais il n'y a rien de dificille...

Bon courage!


V.

[invite75bf7adf]

D'accord, merci pour tes réponses.
Si j'ai bien compris il n'y a pas de principes stricts: tout dépend des cellules et j'apprendrai au fur et à mesure de mes manips.

[Vinc]

Tout à fait!

V.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invitefe7ff779]

Bonjour,
Ça dépend effectivement de la lignée cellulaire.
Pour te donner un idée tu peux aller sur le site de "American Type Culture Collection" = ATCC : www.atcc.org (Je viens d'aller voir, le site est momentanément indisponible mais tu peux essayer plus tard). C'est le site d'une boite américaine qui possède notamment une banque de lignée cellulaire où bien souvent les labo commandent les lignées. Ils ont une sorte de fiche technique pour chaque lignée. Sur la page d'accueil il te suffit de cliquer sur le lien "cell lignes and hybridomas" (sur la gauche de la page). Ce lien va t'ouvrir une page ou une fenêtre (je ne me souviens plus très bien) dans laquelle tu vas pouvoir saisir le nom de la lignée qui t'intéresse. Là, tu pourras trouver des informations sur la lignée, comme le temps de doublement, les compositions de milieux, quand les changer... Ça peut te donner des informations intéressantes


Te stress pas trop, avec un peu de pratique ça va aller très bien.
Bon courage

chtefi