Différence entre GUS et RT-PCR

[invite3def1b1b]

bonjour,

Dans un article que je dois analyser, les rechercheurs ont fait une RT-PCR et utilisé un gène reporteur GUS afin de savoir où l'expression du gène en question se localisait...

En fait je me posais une bête question... à part au niveau technique, quelle est la différence entre ces 2 techniques? par exemple pour la conclusion des resultats, peut on conclure quelque chose en plus ou en moins selon qu'on utilise l'une ou l'autre expérience?

je sais que GUS est fusionné au promoteur du gène...
Ensuite, ce gène code pour la glucuronidase qui en présence de X-gluc forme un précipité bleu
Ce precipité bleu se trouve donc a l'endroit où le gène s'exprime...

Pour la RT-PCR, on extrait les ARN de différents tissus et amplifie les ARNm que l'on souhaite a l'aide d'amorce spécifique du gène. Ainsi, on obtient des bandes au niveau du tissus dans lequel le gène s'exprime...

Donc en fait, ces 2 techniques permettent de savoir où le gène s'exprime...
Il n'y a donc pas de différence entre les 2?

Imaginons qu'avec GUS fusionné au gène X on me dit qu'il y a une plus grande intensité dans le meristeme apical de tige...
Tandis qu'avec la RT-PCR on me dit qu'il y a une bande au niveau des apex
Y a t il une différence entre ces 2 résultats?

Merci d'avance de vos éclaircissement, je n'arrive pas à voir la différence au niveau de l'interprétation des résultats.


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[invite4ff9937a]

Salut

Peut-être est ce plus facile de voir directement ou le géne s'exprime plutôt que de prélever CHAQUE type de tissus et de faire la RT-PCR

[invite3def1b1b]

peut etre... mais d'un point de vue interpretation de résultat il n'y a donc pas de différence entre les 2?

Apex et méristème apical de tige c'est pareil?

De plus, une autre question me vient, pourquoi est ce que si on laisse trop longtemps agir le gène reporteur GUS, la coloration bleue peu s'étendre?

...

tant de questions, je vais tenter l'ami google aussi

[MaliciaR]

Hello,

je sais que GUS est fusionné au promoteur du gène...
Ensuite, ce gène code pour la glucuronidase qui en présence de X-gluc forme un précipité bleu
Ce precipité bleu se trouve donc a l'endroit où le gène s'exprime...

Pour la RT-PCR, on extrait les ARN de différents tissus et amplifie les ARNm que l'on souhaite a l'aide d'amorce spécifique du gène. Ainsi, on obtient des bandes au niveau du tissus dans lequel le gène s'exprime...

Donc en fait, ces 2 techniques permettent de savoir où le gène s'exprime...
Il n'y a donc pas de différence entre les 2?

Différence il y a pourtant, et pas négligeable.

Dans le cas du gène rapporteur GUS, tu as localisation de l'expression à un endroit précis in situ. Autrement dit, je souhaite savoir où et quand s'exprime le gène tartampion, je fais donc une construction fusion entre le gène GUS et le promoteur du gène d'intérêt et je suis l'apparition de la coloration bleue. Ce qui est important là c'est que le gène GUS code comme tu l'as précisé pour une enzyme donc je pourrai suivre l'évolution de l'activité enzymatique au cours du temps : cela me donnera une cinétique via laquelle je pourrai déterminer la cinétique d'expression du gène d'intérêt. Ainsi, on peut donc étudier la régulation d'expression du gène et établir des patterns d'expression en fonction de l'endroit et du moment de développement.

En ce qui concerne la RT(Reverse Transcriptase)-PCR, tu as affaire à une autre approche. En fait, tu pars des ARN totaux et tu cherches à amplifier le transcrit du fameux gène tartampion. Tu n'es plus in situ. Ce qui est important ici, c'est que tu fais une détection et une quantification des ARNm de ton gène d'intérêt.

J'espère que c'est un peu plus clair. Si tu as d'autres questions, n'hésite pas, j'essaierai d'y répondre


Cordialement,

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite3def1b1b]

Dans le cas du gène rapporteur GUS, tu as localisation de l'expression à un endroit précis in situ. Autrement dit, je souhaite savoir où et quand s'exprime le gène tartampion, je fais donc une construction fusion entre le gène GUS et le promoteur du gène d'intérêt et je suis l'apparition de la coloration bleue. Ce qui est important là c'est que le gène GUS code comme tu l'as précisé pour une enzyme donc je pourrai suivre l'évolution de l'activité enzymatique au cours du temps : cela me donnera une cinétique via laquelle je pourrai déterminer la cinétique d'expression du gène d'intérêt. Ainsi, on peut donc étudier la régulation d'expression du gène et établir des patterns d'expression en fonction de l'endroit et du moment de développement.

En ce qui concerne la RT(Reverse Transcriptase)-PCR, tu as affaire à une autre approche. En fait, tu pars des ARN totaux et tu cherches à amplifier le transcrit du fameux gène tartampion. Tu n'es plus in situ. Ce qui est important ici, c'est que tu fais une détection et une quantification des ARNm de ton gène d'intérêt.


bonjour

donc en fait la grande différence c'est que GUS c'est in situ et pas RT-PCR. Mais la RT-PCR permet tout de même de localiser... mais moins précisément alors?

mais pour la RT-PCR on fait une détection des ARNm, mais pour la technique GUS aussi non? la couleur bleu correspond a la synthese du fameux gène tartempion non?

et RT-PCR permet quantification des ARNm, ça signifie que les ARNm sont plus abondants dans certains tissus, et que la RT-PCR permet de détecter cela...

donc en résumant

GUS:
- in situ--> permet de localiser précisément le gène et quand il est transcrit
-on peut suivre la dynamique de la synthèse du gène

RT-PCR:

-permet de localiser l'ARNm et quand aussi, si on compare des plantes de jours longs ou courts par exemple
- permet de quantifier les ARNm selon le tissus, ce que GUS ne sait pas faire


c'est dejà un peu plus clair dans ma tete


merci beaucoup maliciaR