Détection enzymatique

[glop]

Bonjour!

Qui pourrait me donner des infos sur le principe de la détection enzymatique? Je ne trouve rien sur le net...

Merci beaucoup!
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[glop]

Vraiment personne pour m'aider?

[zombiedupont]

Bonjour,

le problème c'est que c'est un domaine extrêmement large, donc résumer cela en 3 lignes relève de l'impossible!!!

En effet de très nombreuses techniques peuvent être employées. De la plus simple qui est la détection de la formation d'une effervescence dans la recherche de la catalase, à l'immunofluorescence... le net fourmille d'infos, il faut prendre un peu de temps, en commençant par Wikipédia qui donne une bonne approche. Bon courage.

[glop]

Alors en fait dans un exercice on me dit que la détection d'une activité phosphatasique est effectuée par incubation, à pH acide, de follicules en présence d'un substrat susceptible d'être dégradé par l'enzyme et d'un réactif approprié.
De plus j'ai une photo d'une cellule thyroidienne où l'appareil de Golgi ainsi que des lysosomes sont marqués.
On me demande de rappeler le principe de la détection d'une activité enzymatique, et de dire à quoi signifie le précipité qu'on observe.
Je n'ai rien dans mon cours sur l'activité enzymatique et sa détection!
Alors une petite piste m'aiderait beaucoup. Merci!

[A voir en vidéo sur Futura]

[glop]

Alors personne?
Svp ça m'aiderait beaucoup pour la suite de l'exo! Merci.

[MaliciaR]

Bonjour,

Comment peut-on résumer une activité enzymatique? Je pense que tu sais, mais le nom te fait peur

Te l'expliquer clairement serait un peu faire l'exo à ta place


Cordialement,

[glop]

Merci de m'avoir répondu! Alors je ne vois pas de quel nom tu parles
Quoi qu'il en soit, l'activité enzymatique est spécifique: à une enzyme correspond un site actif spécifique.
Ce que je sais d'autre, c'est qu'en présence d'enzymes, le substrat va être transformé en produit.
Ici le substrat c'est la thyroglobuline, qui est hydrolysée dans les lysosomes. Il en sort T3 et T4, qui sont excrétés dans le sang, et des aa, des oses, MIT et DIT qui sont recyclés.

Voilà ce que je peux dire là dessus, mais concernant la détection de l'activité enzymatique...là je sèche. En fait c'est le mot "détection" je crois qui me pose problème....

[glop]

J'ai trouvé ça aussi:
l'orientation des glycoprotéines vers leur destination lysosomale se fait grâce à un signal chimique constitué par le mannose-6-phosphate. Le récepteur au mannose-6-phosphate lie les polysaccharides spécifiques à pH 7 et les libères à pH 5: le récepteur est recyclé vers le Golgi par des vésicules à clathrine.

Mais bon, ça m'avance pour conprendre les lysosomes, mais pas pour la détection...

[MaliciaR]

Quoi qu'il en soit, l'activité enzymatique est spécifique: à une enzyme correspond un site actif spécifique.

Attention : chaque enzyme a un site actif et la réaction entre l'enzyme et son substrat est caractérisée par une spécificité.

Ce que je sais d'autre, c'est qu'en présence d'enzymes, le substrat va être transformé en produit.

C'est de ça que je voulais te parler justement Donc, si l'on connaît le substrat et le produit, on pourra avoir une image de la manière de fonctionner de l'enzyme, autrement dit de ... (à toi ).

Ici le substrat c'est la thyroglobuline, qui est hydrolysée dans les lysosomes. Il en sort T3 et T4, qui sont excrétés dans le sang, et des aa, des oses, MIT et DIT qui sont recyclés.

Bon, on n'est pas loin. Quels composés sont marqués dans ton exo?
Qu'est-ce que l'on regarde précisément?

Voilà ce que je peux dire là dessus, mais concernant la détection de l'activité enzymatique...là je sèche. En fait c'est le mot "détection" je crois qui me pose problème....

C'est pour cette raison que je te dis que c'est un blocage dû au nom donné à un truc que tu connais

Quel est ton niveau d'études?

J'ai trouvé ça aussi:
l'orientation des glycoprotéines vers leur destination lysosomale se fait grâce à un signal chimique constitué par le mannose-6-phosphate. Le récepteur au mannose-6-phosphate lie les polysaccharides spécifiques à pH 7 et les libères à pH 5: le récepteur est recyclé vers le Golgi par des vésicules à clathrine.

Mais bon, ça m'avance pour conprendre les lysosomes, mais pas pour la détection...

Ca dépend
Regarde bien ton exo et établis plusieurs choses essentielles : ce que je connais, ce que je cherche à connaître, ce dont je me sers pour y parvenir.


Cordialement,

[glop]

C'est de ça que je voulais te parler justement Donc, si l'on connaît le substrat et le produit, on pourra avoir une image de la manière de fonctionner de l'enzyme, autrement dit de ... (à toi ).

Heu...de son activité? Donc à quel endroit elle coupe la thyroglobuline?

Quels composés sont marqués dans ton exo?

Hum...il est presque minuit et je viens de comprendre un truc! Enfin je crois. La thyroglobuline iodée est marqué par de la ferritine, et elle est située dans la colloide, mais aussi dans les vésicules d'excrétion. Mais pas dans les lysosomes! Or la ferritine a marqué l'iode. Donc il n'y en a plus dans les lysosomes, les phosphatases ont donc "coupé" la thyroglobuline iodée et il en résulte du T3 et du T4 qui va être sécrété dans le sang, et l'iode sera recyclé.

Bon...reste toujours ce blocage à ce foutu mot! J'espère que la nuit portera conseil.

Encore merci!

[MaliciaR]

Oui, de son activité
Si je peux suivre soit l'apparition du produit, soit la disparition du substrat, je pourrai déterminer quelle est l'activité de la responsable de ces transformations : l'enzyme.

Laisse tomber le mot pour l'instant. A ta place, je ferais l'exo pour avoir les résultats, si tu as quelque chose de cohérent (= tu as bien travaillé ), tu trouveras le mot à mettre sur les choses.

Bonne nuit!

[glop]

En fait les enzymes catalysents les réactions non? Donc pour détecter une activité enzymatique, il faut regarder à quelle vitesse le substrat se transforme en produit?

Bon, je récapitule...
Voici ce qu'on me demande:
On me dit que la détection d'une activité phosphatasique est effectuée par incubation, à pH acide, de follicules en présence d'un substrat susceptible d'être dégradé par l'enzyme et d'un réactif approprié.
De plus j'ai une photo d'une cellule thyroidienne où l'appareil de Golgi ainsi que des lysosomes sont marqués.
On me demande de rappeler le principe de la détection d'une activité enzymatique, et de dire à quoi signifie le précipité qu'on observe.

Bon alors, les lysosomes sont formés dans le Golgi, ils rentrent en contact avec les vésicules de phagocytage pleines de thyroglobuline iodée. En présence d'enzyme, la phosphatase, la thyroglobuline iodée est découpée, il en sort T3 et T4 qui sont sécrétés dans le sang, et I-, MIT et DIT qui vont être recyclé. Voilà pour le fonctionnement.

Maintenant pour ce qui est de répondre précisément aux 2 questions posées, à savoir de rappeler le principe de la détection d'une activité enzymatique, et de donner la signification du précipité observé...c'est toujours le même problème...je sèche Pourtant ça doit être tout con!

[glop]

La phosphatase j'ai pas non plus réussi à trouver ce quelle fait. Elle coupe un phosphate? Pour faire quoi?

Merci de m'aider je suis un peu dans le brouillard! Ca fait un moment que je tourne en rond sur cette question ça m'énerve

[Alegs]

Salut!! Alors, je vais te dire ce que j'en pense en gros...

Déjà la phosphatase, je crois qu'elle a une action contraire de celle d'une kinase. Une kinase rajoute 1 phosphate, une phosphatase te la retire.

On me demande de rappeler le principe de la détection d'une activité enzymatique, et de dire à quoi signifie le précipité qu'on observe.

Le principe de la détection d'une activité enzymatique. Et bien sur le principe, c'est simple je dirais: au début t'as un un réactif et qui, avec autre chose, donnera lieu à une réaction et formera un produit. Or, bien souvent, cette réaction met beaucoup de temps avant de se terminer... D'où la nécessité d'un catalyseur biologique pour accélérer cette réaction (on va pas attendre 10 000 ans que le groupement phosphate atteigne notre produit par inadvertance: l'enzyme va te les mettre côte à côte et donc ça va favoriser la réaction): l'enzyme.

Donc ce sur quoi agit l'enzyme est le substrat, et le produit formé, bien évidemment, ça reste le produit de la réaction.
Or, en résumé, tu peux essayer de faire l'expérience avec et sans l'enzyme, et c'est donc si t'as bien compris sur la vitesse que ça va se jouer. La vitesse c'est quoi? C'est par unité de temps, c'est même le nombre d'unités produites on pourrait dire, par unité de temps... C'est même de la rentabilité en fait.
Alors tu regardes ce que t'as avant, ce que t'as après, et si t'as beaucoup plus de nouveaux produits formés avec l'enzyme, et bien t'as trouvé la différence.


Cela dit, en pratique, pour détecter l'activité de l'enzyme, il faut déjà avoir un marqueur. Et même pour être plus précis, il va falloir que t'aies un marqueur spécifique de ce que tu veux mesurer. Toi, potentiellement, ce qui t'intéresse, c'est de mesurer ou la quantité de substrat, ou la quantité de produit. Normalement, le substrat devrait diminuer, et la quantité de produit devrait augmenter. Il y a aussi un autre cas de figure, c'est que l'enzyme est encore complexée avec ce constituant. Enfin bref, au final il faudrait que tu aies par exemple dans le cas du produit, des anticorps fluorescents qui florescent quand ils sont en contact du produit, et donc tu comptes le nombre de lumières et après t'as ton nombre de produits, t'as pris soin bien sûr au passage de chronométrer et au final t'as ta vitesse de réaction...


Bon voila, c'était un peu en vrac, en espérant que ça t'éclaire un peu, ou que quelqu'un d'autre, attiré par ce que je viens de dire, nous éclaire tous les deux!

[glop]

Merci Alegs, je crois que j'ai compris un peu mieux!

[invite9eab997a]

Bonjour,
pour détecter l'activité de l'enzyme tu peux aussi ajouter un substrat spécial qui va donner un produit caractéristique facilement identifiable (un précipité, un produit coloré, etc). Là où tu auras ce signal, tu pourras conclure à la présence d'une enzyme active. Donc tu auras détecté une activité enzymatique

[glop]

Merci BioCell!

On me dit que la détection d'une activité phosphatasique est effectuée par incubation, à pH acide, de follicules en présence d'un substrat susceptible d'être dégradé par l'enzyme et d'un réactif approprié.
De plus j'ai une photo d'une cellule thyroidienne où l'appareil de Golgi ainsi que des lysosomes sont marqués.
On me demande de rappeler le principe de la détection d'une activité enzymatique, et de dire à quoi signifie le précipité qu'on observe.

Dans mon exemple je pourrais utiliser quel substrat? Et concernant la signification du précipité observé?

[invite9eab997a]

Je ne connais pas les substrats pour les phosphatases mais je ne pense pas que tu en aies besoin dans l'énoncé. Ensuite, si tu lis bien, tout est dit dans l'énoncé!

[glop]

Ben...le précipité observé signifie qu'il y a eu une activité enzymatique?
Les lysosomes ont dégradé le substrat avec les enzymes phosphatasiques?

[invite9eab997a]

Tu n'as pas l'air convaincu(e)! Quels sont tes arguments pour aboutir à cette conclusion?

Cordialement,

[glop]

Non je n'ai pas l'air très convaincu, ça fait quelques temps que je butte sur cette question, j'ai l'impression de tourner en rond! Du coup c'est assez confus dans la tête...

le précipité observé signifie qu'il y a eu une activité enzymatique?
Les lysosomes ont dégradé le substrat avec les enzymes phosphatasiques?

Alors le Golgi et les lysosomes sont marqués, on y trouve des enzymes de digestion pour recycler les composés (ici la thyroglobuline iodée). De plus les enzymes de digestion doivent être marquées par le mannose-6-phosphate, pour qu'elles soient bien acheminées vers les lysosomes, sinon on courrait à la catastrophe!

Voilà pour mes arguments.

[invite9eab997a]

la détection d'une activité phosphatasique est effectuée par incubation, à pH acide, de follicules en présence d'un substrat susceptible d'être dégradé par l'enzyme et d'un réactif approprié.

Si on te dit qu'il faut un réactif approprié pour détecter l'activité des phosphatases et que dans les résultats de l'expérience tu observes comme par hasard un précipité, tu peux en déduire que le précipité est ce fameux "réactif approprié".
A toi de continuer..

[glop]

D'accord donc la thyroglobuline iodé qui est le réactif a réagit avec les phosphatases, pour former des iodures, du MIT, Dit, T3 et T4 et des aa.
C'est ça?
J'ai comme l'impression de mélanger les pinceaux...

[invite9eab997a]

Dans l'énoncé je n'ai pas vu qu'on parlait de thyroglobuline en particulier. On te dit juste "substrat+réactif approprié". Ca peut être n'importe quoi (enfin pas n'importe quoi mais je n'ai pas la moindre idée de ce que ca peut etre ..). Le fait d'observer un précipité dans les lysosomes te permet de conclure: il y a des phosphatases dans les lysosomes.
C'est tout. Si on te dit: le substrat c'est la thyroglobuline et on détecte sa forme clivée par le réactif bidule qui forme un précipité, alors là oui tu peux aller plus loin dans tes conclusions.
J'espère que c'est plus clair pour toi.

[glop]

J'ai compris
Merci!