Principe de l'extraction d'ARN???

[Kinnette2910]

Bonjour,

J'utilise pour l'extraction d'ARN, le kit Qiagen RNeasy(extraction en colonne), voila j'aimerai savoir sur quels principes il repose...

Alors voila pour moi l'ARN en solution n'a pas la même charge selon s'il est en solution aqueuse ou dans de l'alcool par exemple...
Ainsi il serait capable de se fixer à la colonne dans un tampon contenant peu d'eau, puis lorsque l'on rajoute l'eau à la fin il changerait de charge ce qui provoquerai son élution???
Pas très très clair tout ca, je suis peut être totalement dans le faux...

Merci d'avance pour vos précieuses explications
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[Tiscarab]

il me semble que c'est une chromatographie d'echange d'ions

[Kinnette2910]

il me semble que c'est une chromatographie d'echange d'ions

Tout d'abord merci pour la réponse. Ca me semble une bonne piste.
Est ce que tu aurais plus d'infos???

[Kinnette2910]

Bonsoir à tous,
J'ai vainement essayer de trouver une réponse à ma question en faisant partant de la piste donnée par Tiscarab... Mais rien de très concluant, la seule chose précisée dans le protocole est "que la méthode combine les propriétés de fixation sélective des membranes de silice et de multiples étapes de centrifugation"... Ca ne m'aide pas vraiment...
Merci à tous (tes)

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite79568c77]

oui c'est une chromatographie méttan en jeu les charges négative des ADN ET ARN !

Pour isoler l'ARN il faut le retenir ! et eliminer les protéine par dénaturation ( chauffage) et eliminer l'ADN par DNase)

Pour détacher l'ARN purifié on utilise de l'eau

[emma59]

Non ce n'est pas de l'échange d'ions.
Les acides nucléiques sont "adsorbés" sur la colonne. L'éthanol 70%permet de faire précipiter les AN tout en procurant assez d'eau pour dissoudre les sels des tampons qui eux neutralisent les charges des AN.
L'ADN et les prot résiduelles sont éliminées par les lavages (RW1 et RPE). L'éthanol du tampon permet aussi d'éluer selectivement l'ADN afin de n'obtenir que l'ARN au final.
Voili voilou mais Qiagen ne dévoile pas ses petits secrets de recettes de tampon...

[invite79568c77]

Ils sont retenu comment alors sur la colonne ?
Je pense que la colonne du "Spin basket" était sensibilisé avec des charges positives !! ?

[emma59]

Pour simplifier les ARN sont retenus essentiellement par des laisons hydrogènes. La silice réagit plus ou moins selon la teneur en eau du milieu (d'où l'utilisation d'éthanol). Pour réactiver une silice on la charge en eau d'où l'élution finale de l'ARN dans l'eau qui la libère de l'ARN en remplaçant les liaisons H silice-ARN par des liaions H silice-eau. Cependant d'autres liaisons peuvent intervenir Van der Walls ou polaires mais négligeables je pense surtout que les charges des acides nucléiques sont neutralisées dans les tampons.
Il me semble que ça se passe comme ça.
Amicalement