Western Blot

[emma59]

Bonjour à tous!

J'aurais quelques questions à propos du Western Blot.
J'ai souvent utilisé cette technique sans problèmes mais ces derniers temps j'ai des petits soucis.
D'ordinaire je transfert en utilisant de l'éthanol et mon transfert est correct. Par contre, lorsque j'utilise le méthanol, mon transfert est partiel alors que théoriquement le méthanol convient aussi bien.Je me demandais pourquoi (j'utilise de la nitrocellulose).
Par ailleurs, mes anticorps secondaires sont un peu "vieillos" mais néammoins congelés avec du glycérol. Mon signal final sur le film est "faiblard"; j'ai vérifié mon kit ECL et même employé celui d'un collègue. Mon anticorps secondaire peut-il être périmé à ce point en 2 ans? Faut-il l'utiliser à l'obscurité comme ceratin le préconise bien que d'ordinaire il marchait même à la lumière?
Merci de m'éclairer un peu.
Amicalement
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[Zellus]

Bonjour,

Par ailleurs, mes anticorps secondaires sont un peu "vieillos" mais néammoins congelés avec du glycérol. Mon signal final sur le film est "faiblard"; j'ai vérifié mon kit ECL et même employé celui d'un collègue. Mon anticorps secondaire peut-il être périmé à ce point en 2 ans?

Deux ans c'est déjà pas mal. Vous ne lui faites pas subir trop de cycles de congélation/décongélation ?

[emma59]

Hello!

Non l'anticorps est aliquoté donc je décongèle un nouveau aliquot à chaque fois.