Bonjour,
Je fais des co-extractions ADN/ARN et la dernière étape de mon protocole est une précipitation au PEG 6000 (Polyéthylène glycol) pendant 2h à température ambiente.
Je voudrais savoir quelle est l'action du PEG sur les acides nucléiques? Dans la bibliographie ils utilisent souvent soit du PEG 6000 soit du PEG 8000, est-ce que le PM est d'une grande importance?
Merci d'avance
Le PEG étant très hygroscopique, je pense que c'est pour déshydrater les acides nucléiques et former des sels d'ADN (précipité que tu récupères par centrifugation).
En ce qui concerne l'influence du PM, je pense qu'il faudrait plutot voir avec les chimistes, mais je dirais que ca depend de ce que tu as dans le labo. Le PM dépend du nombre de répétition du groupement éthylène, capable de fixer les molecules d'eau je dirais.
Bonjour,
Merci pour cette réponse, j'ai des idées où en chercher un peu plus maintenant.
Ce qui m'intéresserait aussi, c'est de pouvoir baisser la température lors de la précipitation. C'est à dire au lieu de laisser les échantillons à T°C amb pendant 2h, de les laisser plutôt à 4°C même si le temps s'allonge. Pensez-vous que l'effet sera le même?
Merci encore
Bon mes souvenirs de chimie remontent un peu, mais il me semble que la solubilité d'un sel diminue avec la température. Tu vas avoir un précipité, mais il est possible que tu précipites préférentiellement certains sels d'acide nucléique en changeant la température. J'avais utilisé une fois cette technique pour purifier une banque de cDNA dans un autre labo, et je n'ai plus en tête mes conditions exactes.
Tu peux essayer au froid, mais en gardant le surnageant après centri. Tu pourras à ce moment déposer le culot resuspendu et une fraction d'un surnageant sur gel pour comparer.
Je te remercie
