Hybridation ADNc / ADNg : besoin de confirmer !
Bonjour tout le monde. Je voudrais simplement mettre à l'épreuve mon raisonnement.
J'ai l'ADNc d'un gène et je récupère deux fragments :
- Un fragment NcoI/NcoI de taille 1Kb ; après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde N.
- Un fragment HindIII/HindIII de taille 0,3Kb ; après marquage des extrémités 5'P on parlera de sonde H.
Lorsque je fais un Southern de l'ADNg :Jusque là tout vas bien : sur notre ADNg : on a bien deux sites de restrictions adjacents HindIII qui donnent un fragment de 0,3Kb et qui hybrident avec ma sonde H.
- ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde H : on obtient un signal d'hybridation de 0,3Kb.
Ça se complique un petit peu, j'émets alors l'hypothèse suivante : sur notre ADNg il y a deux sites de restrictions NcoI adjacents qui donnent un fragment de 1,8Kb. Pour expliquer les 0,8Kb, j'ai pensé à un intron situé "au centre" de mon fragment d'ADNg NcoI/NcoI.
- ADNg digéré par NcoI + hybridation sonde N : on obtient un signal d'hybridation de 1,8Kb.
Arrêtez moi si il y à d'autres explications ou que la mienne ne tient pas la route.
En fin :D'après moi, cette expérience confirme mon hypothèse de présence d'un intron de 0,8Kb sur le fragment d'ADNg de 1,8Kb NcoI/NcoI. En effet, si on obtient deux bandes radioactives, c'est que notre fragment de 1,8Kb est coupé en deux par l'enzyme HindIII & la sonde N hybride avec ces deux fragments. Or notre sonde N d'ADNc de 1Kb (je rappelle NcoI/NcoI) ne possède pas de site de restriction pour HindIII donc il existe un site de restriction pour HindIII dans l'intron de 0,8Kb.
- ADNg digéré par HindIII + hybridation sonde N : on obtient deux signaux d'hybridation de 1,4Kb & 7,6Kb.
Je vous remercie d'avance de m'avoir aidé.
Amicalement lnk
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