Bonjour,
je souhaiterais avoir des renseignements afin de détecter par western blot une protéine contenue dans le milieu de culture de cellules. Faut-il concentrer (précipitation, ultracentri, chromato,...) les protéines présentes dans le surnageant de la culture ? Comment procéder ?
Merci d'avance pour vos réponses.
Il y a quand même une chance que la protéine soit diluée... Encore que le WB est sensible.
On peut peut être conseiller la technologie centricon/microcon. Facile.
Sinon sur ce forum, Gorben parle souvent d'une précipitation au TCA qui permet de concentrer les protéines. Ca devrait aussi pouvoir vous intéresser.
Maintenant le plus simple est encore de prélever 10-20 µl de votre surnageant et de tester votre WB. Si ça se passe bien vous aurez votre réponse sans attendre. Si ça se pas mal (pas de signal ou alors signal très faible du genre bande subliminale après 2h d'exposition) vous pourrez toujours concentrer.
Cordialement,
piwi
Je sers la science et c'est ma joie.... Il parait.
