Bonsoir,
Est-ce que ça choque quelqu'un dans l'assemblée si je dis qu'une bactérie peut transcrire ses gènes alors qu'elle ne se réplique plus (sous l'action d'un antibiotique par exemple) ?
En d'autres termes, peut-il y avoir transcription de gènes cellulaires sans réplication de la cellule ?
C'est totalement independant
Apres faut voir la nature de ton antibiotique
OK, je cherchais une confirmation car j'attends des résultats dans ce sens mais ils n'arrivent pas .....
Peux-tu etre plus precis ?
Ca m'interesse
Bin, grosso modo, je mets un antibiotique dans une culture bactérienne et je regarde la réplication et la transcription.
Réplication : pas de problème (enfin j'pense...).
Transcription : Mes pauvres ARN sont tellement timides que je les perds rapidement.
Donc même avec des antibio bactériostatiques je n'ai plus de transcription, strange isn't it ?
En attendant de travailler dans des locaux certifiés RNAse free, j'essaye de comprendre ce qui se passe...
D'ailleurs je dois aller leur rendre visite dimanche Pfff..
Qu'est-ce que tu veux faire exactement ?
Que veux-tu montrer, verifier ?
Evaluer l'activité d'antibiotiques par PCR.Qu'est-ce que tu veux faire exactement ?
Quel est l'antiobiotic ?
Par RT-PCR tu veux dire ?
Plusieurs : bactériostatiques à bactéricidesQuel est l'antiobiotic ?
Les 2. PCR/RT-PCRPar RT-PCR tu veux dire ?
PCR et RT-PCR sur quoi ?
PCR sur des gènes de structure bactériens
RT-PCR sur du 16S
Et t'as du mal a detecter le 16 S ?
Et oui..pourtant je sais, il devrait y en avoir des tonnes...
Quand je ne mets pas d'AB, je détecte bien le 16S, par contre pour des petites concnetrations d'AB j'en ai quasiment plus.
C'est quoi comme antibiotic ?
Plusieurs.
Fluoroquinolones : donc là je comprends que je n'ai plus de 16S
Macrolides et tétracyclines : en théorie bactériostatiques donc dans ce cas je devrais avoir une trace de 16S quelle que soit la qté d'AB.
Les tetracyclines et macrolides sont des ATB qui inhibent la synthese peptidique. Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non?
Les genes de menage sont autants exprimés? genre GyrB ou rpoA?
Si tu le dis....Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non?
C'est connu ça comme mécanisme ?
Pas d'autres gènes de ménage testés.Les genes de menage sont autants exprimés? genre GyrB ou rpoA?
Je ne vais pas tarder à arrêter mes ARN, ca marche pas, ça m'
Certaines proteines du ribosomes s'auto-regulent (genre L22) un surplus de ribosome non actif inhibe peut etre sa propre transcription... et diminue la quantité de 16S... non?
Si tu le dis....
C'est connu ça comme mécanisme ?
Non c'est pas trop connu.
Ce qui est sur c'est que la L22 s'auto-regule, pour le reste ce n'est que pure speculation de ma part.
Pour le verifier tu devrais tester des genes de menage. Tu verrais vite si tu as un arret de transcription global ou juste ciblé sur les composants de ton ribosome.Citation:
Les genes de menage sont autants exprimés? genre GyrB ou rpoA?
Pas d'autres gènes de ménage testés.
Je ne vais pas tarder à arrêter mes ARN, ca marche pas, ça m'
Tu peux aussi essayer avec un ATB qui bloque la synthese de la paroi pour verifier si c'est l'arret global de la traduction qui bloque l'expression des genes.
Tu bosses sur quel modele? Parce que avec la tripotée de regulateur transcriptionnel qu'il y a chez certaines bacteries, ce serait pas etonnant qu'un arret de traduction bloque la transcription...
Salut !
Si tu as un problème à détecter les ARN, ca vient peut être de la détection en elle même. En passant par une détection des protéines (électrophorèse 2D), tu pourrais voir si il y a un changement au niveau de le synthèse des protéines. Ca ne t'aide peut être pas directement pour ta technique, mais ca peut permettre de vérifier si c'est un problème de méthode ou de principe.
Merci pour vos suggestions, mais j'ai définitivement jeté l'éponge sur les ARN.
As tu tout de meme verifé que tes antibios n'inhibaient pas la TAQ ?
Yoyo
y a un truc qui est connu quand même.
C'est que certains ARNr sont polycistroniques avec des ARNt. Ca permet de reguler le contenu d'ARN selon les besoins.
Mais si tu bloques la transcriptions tu te retrouves avec un exces d'ARNt qui est percu comme un exces d'ARNr aussi pour le coup.
Je connais que la base sans vraiment pouvoir presenter tout le mecanisme mais ca pourrait expliquer la chute de tes ARNr quand même. A creuser peut être... Même si je pense moi aussi que la reponse finale doit bien être ailleurs.
Pas facile les ARNEnvoyé par Meningo
