Anticorp anti-espece et Western Blot

[invite5b66631c]

Salut tout le monde, voila je m'en remet encore à ce forum grâce aux nombreuse imprécision de mes cours ^^

Lors d'un Western Blot, ou d'un comarquage quelconque avec l'utilisation d'AC1 marqué et amplification par un AC2 anti-AC1
Savez vous pourquoi on utilise par exemple dans un cas:
AC1= de souris et AC2= de souris
mais dans certain cas on a aussi ce cas de figure:
AC1=de souris et AC2= de Lapin (AC anti-espèce c'est ça?)

Y-a t-il une "règle" quand à l'utilisation d'AC de même espèce ou de differente espece?
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[invite77479dce]

Bonjour,
Dans le western blotting, tu vas effectivement utiliser deux anticorps distincts. L'anticorps dit primaire (que tu as nommé AC1), et l'anticorps qui sera dirigé contre la protéine que tu souhaite mettre en evidence par le western blotting. Cetr anticorps aura été produit par immunisation d'un animal en utilisant la protéine d'intérêt comme antigène. (par exemple tu immunises des souris avec la protéine X humaine, et tu récupères un anticorps murin anti-X).
L'anticorps secondaire (que tu as nommé AC2) est celui qui va te permettre de mettre en évidence la réaction AC1-protéine d'intérêt. cet anticorps (AC2) sera couplé à une molécule qui permettra la révélation (en général l'enzyme HRP, peroxydase de raifort). Cet anticorps sera lui dirigé contre l'anticorps primaire, c'est un Ac anti AC1. Par conséquent dans l'exemple, si tu as utilisé un anticorps de souris comme AC1, l'AC2 sera un anticrops anti anti-corps de souris, produit par exemple chez le lapin. le couple AC1-AC2 n'est pas produit dans la même espèce animale, puisque l'AC2 est censé reconnaire l'AC1 comme un antigène.
J'espère avoir été clair, dans le cas contraire, n'hésite pas à le dire.
Bon courage
John

[invite5b66631c]

Enfete le problème c'est que par exemple dans un des QCM comme proposition concernant les differentes étape du WB on avait pour AC2 le choix entre:
Soit un AC2 provenant de Lapin
Soit un AC2 de souris
(sachant que mon AC1 provient de la souris)
Je comprend comment sont synthetisée ces AC (hybridomes etc...)mais j'ai cependant observer des réponses contradictoire, alors quand utiliser celui anti espece et celui de la même espece?
La logique voudrait ici celui de Lapin non?! (ayant injecter serum immun de Souris dans Lapin je ne voit pas comment on aurait pu synthetiser à partir d'une même souris l'AC-Anti AC1)

[invite77479dce]

Tu utiliseras en effet un AC2 d'origine autre que la souris (ici lapin) afin de détecter tes Ac de souris

[A voir en vidéo sur Futura]