Exprimer une protéine fonctionnelle en plasmide
Je désire insérer un cDNA dans un plasmide sous contrôle d’un promoteur CMV pour exprimer cette protéine.
Pour m’assurer que ma protéine est fonctionnelle je dois insérer la séquence de mon cDNA du codon ATG au codon stop… jusque là ok !
Mais, dois-je aussi inclure l’exon qui précède mon codon ATG ? Et surtout dois-je inclure l’exon qui suit mon codon stop et si oui en partie ou totalement ?
salut
Ca depend principalement de la taille de tes exons / introns.
Il semble que la présence d'un intron favorise une bonne expression dans certains cas. D'un autre coté ca peut poser d'autre probleme lors d'une surexpression. En général on clone un cDNA, maintenant si les tailles sont compatibles on peut cloner l'ADN avec ses introns.
YOyo
Pour la taille l’DNA fait un peu plus 6000pb donc je préfèrerai utiliser le cDNA (1500pb), j’ai besoin d’un rendement correct et non optimalisé …( par contre je ne savais pas que des études traitaient de ce sujet … je vais consulter…)
Mais surtout ma question est d’un ordre théorique que je me posais est ce que je suis « obligée » de cloner toute la séquence du cDNA ou juste la séquence entre ATG et mon STOP.
Mais en fait il provient d'où ton ADN, parce que est ce qu'un ADN humain par exemple pourra bien s'exprimer dans une bactérie ? Autrement dit, est ce que la bactérie possède les éléments necessaires pour épisser un gène d'origine différente que le génome bactérien ?
Mais seul le cDNA suffit à exprimer la protéine nan ? En considérant biensur que le promoteur soit déjà dans le plasmide ? Parce que en fait je ne comprends pas bien l'histoire de l'intron avant l'ATG ?
d'un point de vue théorique il te suffit de cloner ta phase ouverte (ATG-> STOP).Envoyé par Istria
Il ne veut pas l'exprimer dans une bactérie puisqu'il précise qu'il clone son gene sous control du promoteur CMV qui est un promoteur viral eucaryote
YOyo
