Salut tout le monde,
Je voudrais faire une miniprep de BAC (bacterial artificial chromosome) afin de verifier par southern la bonne integration d'un insert.
J'ai d'abord utilise un kit "PureLink Quick plasmid miniprep" de chez invitrogen dont le protocole repose sur une lise alkaline suivi d'une etape de purif sur colonne par centrifugation.
A partir de 5mL de culture je n'ai eu que peu voir pas d'ADN. Je pense que ce kit n'est pas vraiment optimum pour des prep de plasmides de tres grande taille.
En regardant sur le net, j'ai trouve un protocole (venant du site de CHORI) ou ils ne faisaient qu'une lyse alkaline suivie d'une precipitation a l'isopropanol et d'un lavage a l'ethanol (donc pas de colone ici). Je viens de suivre ce protocole et la quantite d'ADN recupere me semble suspecte (6microg par microL...), je me demande donc si lors de la lyse alkaline je me debarasse bien de l'ADN genomique de la bacterie?
Pour precision, j'ai utilise les buffers du kit invitrogen pour cette lyse alkaline.
Si cette methode n'est pas la bonne quelqu'un aurait il un protocole de mini prep rapide pour les BACs??
Merci d'avance!
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