Marquage TUNEL!

[cysto]

Bonjour !
pouvez vous me dire svp, à quoi sert le test tunel ?!
merci bien
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[Edelweiss68]

Bonjour,

Quel est le contexte? (ça m'étonnerait qu'il s'agisse d'informatique...)

[cysto]

Non pas d'informatique...
ça concerne le cancer du colon, et la libération des NO par l'aspirine pour induire l'apoptose des cellules tumorales !
alors ? une idée ?

[nowell]

Bonjour

La technique T.U.N.E.L signifie Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labelling

Elle permet le marquage radioactif des UTP qui vont se fixer en 5' de l'ADN clivé en de très nombreux points par les nucléases. Ce processus est amplifié en cas d'apoptose, on aura beaucoup d'extrémités d'ADN. Donc plus le marquage tunel est important plus on aura d'apoptose.

Bien à vous
Nowell

[A voir en vidéo sur Futura]

[Edelweiss68]

Merci pr l'info!

[Flyingbike]

Bonjour

La technique T.U.N.E.L signifie Terminal deoxynucleotidyl transferase dUTP Nick End Labelling

Elle permet le marquage radioactif des UTP qui vont se fixer en 5' de l'ADN clivé en de très nombreux points par les nucléases. Ce processus est amplifié en cas d'apoptose, on aura beaucoup d'extrémités d'ADN. Donc plus le marquage tunel est important plus on aura d'apoptose.

Bien à vous
Nowell

petite précision : c'est destiné à la microscopie ou au comptage, et on utilise maintenant plutôt un marquage fluorescent.

[cysto]

Bonjour tout le monde,

Après avoir compris le principe du test tunel, j'ai deux questions à poser :
1- Qui clive l'ADN qu'on marquera par la suite avec un fluorochrome: est ce le phénomène recherché qui induit une apoptose ou est ce les DNAses I (selon mon protocole) ??
2- Pourquoi rajouté le DAPI (à part le fait qu'il marque l'ADN, sachant que notre ADN est sensé être marqué par le fluorochrome) ??

En fait, je fais l'économie d'une nouvelle discussion, sachant que celle ci je l'avais ouverte il y a bien longtemps !!
Merci pour votre réponse,

Bien cordialement,
cysto

[Flyingbike]

1) on marque les extrémités des ADN, produites par clivage lors de l'apoptose. La DNAse sert en général de contrôle positif, pour générer des fragments d'ADN qui seront donc marqués
2) le DAPI sert à marquer tous les noyaux, comme une contre-coloration. EN effet pour quantifier le TUNEL il faut compter les noyaux marqués mais le rapporter au nombre de noyaux total.