Bonjour
j'ai conglé par erreur mes cellules (cellules pancéatiques humaines) dans un milieu (SVF + DMSO 20%) différents de celui dans lequel ellles doivent être congélées (milieu de cuture RPMI+ DMSO 10%). est ce que mon erreur aura de grave conséquences sur le fonctionnement de mes cellules. qu'est ce que je peux faire? merci
Bonjour et bienvenue sur Futura Sciences,
Pour la congélation d'une même lignée cellulaire, beaucoup de labos utilisent des milieux de congélation différents. Les points communs que l'on trouve entre les différents milieux est qu'ils sont très riches en sérum et qu'ils contiennent une concentration assez élevée en DMSO (de l'ordre de 10%). Le milieu que tu as utilisé est correct en ce qui concerne le SVF puisque de nombreux milieux de congélation sont fait à partir de SVF pur. La concentration en DMSO est forte et si tu n'as pas congelé "rapidement" tes cellules après les avoir mis en présence de ton milieu, il y a eu peut-être une toxicité irréversible.
Le mieux est de tester une des ampoules que tu as congelé, une fois qu'elle est passé par toutes les étapes (-20°C, -80°C puis azote liquide), et de voir si tes cellules repartent.
Re bonjour
Merci pour ton aide. En fait mes cellules sont bien reparties cependant c'est leur fonctionnement qui m'inquiete un peu car j'ai remarqué un ralentissement au niveau de leur réponse à un test d'ischémie reperfusion, donc je ne sais pas si cela est du à la forte concentration en DMSO.
De l'hypoxie je veux bien, mais de l'ischémie - reperfusion sur des cellules ???Envoyé par arbuste
Concernant la réponse cellulaire, cela peut venir de la densité initiale d'ensemencement. Certaines cellules ont besoin des "copines" pour pousser. Si les 20% DMSO ont induit une mort cellulaire trop importante, tes cellules se sont peut-être épuisées rapidement.
Tu as compté tes cellules après décongélation ? Y'avait-il une différence significative entre ce comptage et ce que tu comptes habituellement ?
