mes échantillons avec le laemmli se transforment en gel !

[invitec89008af]

bonjour à tous,
Je suis nouvelle sur le forum. J’aime beaucoup cet endroit car j’y trouve les réponses à tous mes problèmes. Et justement là j’ai besoin de votre aide.
Pour un western blot je prépare mes échantillons (des surnageants de cellules pour une production de protéine recombinante) dans du laemmli (Tris, SDS, glycérol, bromophenol blue, ß-mercaptoethanol). Jusque là tous va bien, mais après l’étape à 95°C je me retrouve avec une sorte de gel compact dans mon tube. Impossible à pipeter, impossible donc de déposer.
J’ai essayer avec du laemmli sans sds et c’est là même chose.
Avez vous une idée de la cause ? ou avez vous un autre moyen de déposer des échantillons pour un western blot ?
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[piwi]

Vous avez simplement beaucoup de materiel au départ. Si vous pouvez travailler avec moins (exemple: faire de simples WB) vous reglerez votre problème. Sinon (exemple: purif de protéines) il faut simplement soniquer pour fluidifer l'extrait.

Si vous avez un sonicateur, 2 x 3 mins à bonne puissance suffisent en général pour obtenir une solution fluide.

Cordialement,
piwi

[Zdravo]

Je confirme pour le sonificateur.
On l'utilise durant les purifications de prot', ça marche pas mal. Attention tout de fois à la puissance.

Perso je fais plusieurs "pulse"(4 de 30s à 45W) en veillant à conserver mon tube dans un récipient rempli de glace (ça chauffe pas mal ).

[invitec89008af]

merci beaucoup pour vos réponses (qui se recoupent en plus c cool!)
merci à piwi pour sa rapidité. je suis très heureuse d'avoir eu une réponse de ta part car, tu ne le sais pas mais je suis une fan de toi !!!)

[A voir en vidéo sur Futura]

[piwi]

Fichtre! Me voilà flatté d'apprendre que j'ai une fan. C'est un peu angoissant de devenir une rock star comme cela, tout d'un coup.

Quoi qu'il en soit, bonne chance pour vos expériences.

Cordialement,
piwi