Protocole pour le syndrome de Li-Fraumeni.

[invite1b5d2d81]

Bonjour.
Je dois rédiger un protocole expérimental et je n'ai pas la moindre idée des techniques à utiliser, si quelqu'un a une piste pour démarrer.
Voici la problématique.
Le syndrome de Li-Fraumeni est une maladie génétique caractérisée par des néoplasmes épithéliaux. Des résultats préliminaires ont permis de démontrer que, dans ces cellules épithéliales néoplasiques, des anormalités de la protéine p53 étaient fréquemment observées, la plupart localisées dans une portion de séquence correspondant à un exon de 300pb. (Note : Ces mutations ont ensuite été retrouvées dans des cellules fibroblastiques saines de peau de sujets malades.)
A partir d'une famille informative, donnez sous forme de schéma, le protocole expérimental que vous mettriez en place pour détecter les anormalités du gène p53. Précisez sans les décrire, les techniques dont vous aurez besoin à chaque étape.
Rmq : la séquence du gène p53 est connue et tous les outils de génétique et biologie moléculaires sont disponibles.

C'est un peu long.
J’espère que quelqu'un aura une idée.
Merci !
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[Flyingbike]

Ben tu sais que dans cette maladie, il y a des anomalies dans le gène de p53. Il faut donc comparer la séquence de p53 à la séquence sauvage. Il y a une technique bien connue qui permet d'obtenir la séquence d'un gène d'intérêt. Tu as bien une idée ?

[invite1b5d2d81]

Bonsoir Flyingbike.
C'est la méthode enzymatique de Sanger ?

[invite1b5d2d81]

Ou bien la méthode du ChiP.

[A voir en vidéo sur Futura]

[invite1b5d2d81]

[Flyingbike]

En fait ça dépend de ce que tu recherches. Le séquençage est une possibilité. TU sais comment ça marche ?

[invite1b5d2d81]

Oui dans les grandes lignes,
sinon le but final est toujours de trouver un protocole pour déterminer les anormalités du gène.
Je suppose qu'il faut trouver des anormalités dans la séquence (substitution, in/del).
Donc un Southern suivi d'un sequençage me semble une bonne démarche.

[Flyingbike]

pourquoi faire un southern ?

[invite1b5d2d81]

Pour isoler le fragment qui nous intéresse, avant de le séquencer.