Bonjour à vous, j'espère que vous pourrez m'aider je passe un oral cet après midi (16h) et je ne comprend plus un paragraphe que j'ai écris dans mon rapport de stage :
Le plasmide pCR4 Blunt-TOPO vector (Figure11) nous est fourni sous forme linéaire, il possède en 3’ une topoisomérase I du virus Vaccinia. Cette topoisomérase a la capacité de se fixer à des sites spécifiques de l’ADN et de cliver celui-ci au niveau des liaisons phosphodiesters, après le motif 5’-CCCTT. L’énergie libérée lors de cette réaction permet la formation d’une liaison covalente entre l’extrémité 3’ du brin coupé et le résidu tyrosyl-274 de l’enzyme. Cette liaison est ensuite attaquée par l’extrémité 5’ hydroxyl du brin d’ADN à insérer dans le vecteur, ce qui a pour résultats de libérer la topoisomérase I et de lier l’insert au vecteur (Figure12). Pour insérer les produits PCR dans le plasmide pCR4, on réalise donc une ligation qui se fait en 5 minutes.
Je ne comprends pas comment on peut avoir une extrémité 5'hydroxyl ? j'ai lu sur internet que le produit PCR ne possédait pas d'extrémité 5'phosphate, est-ce pour cela ? Et si c'est le cas comment cela est-il arrivé ? je suis sûre qu'il s'agit d'une extrémité 5'hydroxyl car cela est écrit dans le manuel d'utilisation du plasmide (PCR4 blunt topo vector)
De plus quelle liaison covalente se forme-t-il ? je veux dire entre quels atomes ?
MERCI BEAUCOUP si vous pouvez m'aider je suis totalement en panique !!!!!!!
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