Plaques ELISA maxisorp, Covalink, Amino ?

[ELISA86]

Salut tout le monde
Toujours sur mon test ELISA que j'arrive pas à mettre au point...
Je fais donc un ELISA sandwich et j'utilise les plaques NUNC maxisorp mais j'ai vu qu'il existait des plaques ac un traitement leur permettant de lier de manière covalente les protéines mise en coating (Covalink ou amino) et j'aimerais bien essayer quelqu'un a-t-il déjà essayé en sachant que j'ai peur que me le fixe la ou il faut (c'est à dire que le paratope ne soit plus accessible et ce serait gênant lol)
Voilà merci beaucoup
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[gidemartial]

Les palques maxisorp sont les mieux indiquées pour les Elisa par contr si tu veux utiliser les plaques de type Covalink ou immuno qui necessitent d'ailleurs un traitement que j'ignore car ayant peu d'expérience sur ces derniers, je crois que tu pourrais bien avoir un problème avec la sensibilité de ta réaction et une influence sur la qualité des résultats surtout si ta manip est de type quantitative.
A propos quelles difficultés as tu rencontrées avec les plaques maxisorp, je pourrais bien t'aider la dessus car j'ai un peu d'expérience sur les techniques Elisa avec coating des plaques de type maxisorp.
Bon courage

[ELISA86]

en fait j'ai l'impression que quasiment rien ne s'adsorbe au fond de mes puits quand c'est mon anticorps qui est coaté par contre si je coate l'antigène pour le titre de l'anticorps (soit l'anticorps de capture soit le révélation) la ça marche super bien et j'ai meme des faibles concentrations d’antigènes par puits qui sont reconnues (2ng/mL 100µL/puits !!!!) donc je voulais essayer de faire une fixation covalente de mon anticorps au fond de mes puits vu que je suis quasi sure que je lave tout (10µg/mL 100µL/puits !!!!! et en dessous ca marche moins bien.....)
Donc si tu as des idées ou conseils je suis preneuse lol
Merci beaucoup

[vpharmaco]

On peut acheter des microplaques coatees avec des anticorps anti-IgG (goat, mouse , human... on trouve a peu tout).
C'est en general tres efficace pour fixer des anticorps (tres forte affinite, cela evite de denaturer l'Ac d'interet lors de l'absorption).
C'est un peu plus cher, mais cela vaut peut etre le coup d'essayer.

Un exemple: http://www.piercenet.com/products/br...fldID=01040408

[A voir en vidéo sur Futura]

[ELISA86]

effectivement ça a l'air pas mal
en tout cas merci beaucoup pour le conseil

[gidemartial]

Salu Elisa86, désolé du retard, je suis toujours très interressé par ton coating plutôt que par l'achat des plaques déjà coatées. En effet j'aimerais savoir dans quel tampon est ce que tu dilues tes Ac avant de coater les plaques? pour moi je pense que l'adhérence de tes Ac serait liée au réactif que tu utilises car tu peux par exemple utiliser un tampon E.D-Glycérol pour la conservation de tes Ac puis dans un tampon bicarbinate pour ton coating. Avec ceci essaie d revoir de temps à autre la concentration de tes réactifs en fonction des résultats obtenus. Attention la nature de tes Ac n'est pas connue.
Martial