proteinesdans le culot ou le surnageant

[invite0268db77]

Bonsoir a toute et tous
en effet j'en ai un organe ( foie) dans le quel je veux doser la quantite de proteines totale pouvez vous me dire si ma methode et juste
la methode est :
je le broie dans 1 mL de tampon puis je le centrifuge a 42000g pendant 10 min
apres je prend le cullot obtenue et je le resuspend dans 1 mL de triton Hcl 100x et puis j'effectue une deuxieme centrifugation a 10000 g pendant 10 min puis je dose les proteines dans le surneagant
penser vous que ma methode et juste ??
Merci enormement de votre aide
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[Flyingbike]

quel est ton premier tampon ?

42 000 g ? !

Triton Hcl 100x ? c'est quoi ?

Quelle quantité de foie ?

[invite0268db77]

Merci pour votre reponse
je veux essayer de vous expliquer en details et mieux
premiérement vous etes tres gentil de repondre
donc je vous explique en détail:
but: doser l'activité d'une enzyme dans le foie et normaliser cette activité au taux de protéines (dans le foie)
je prend un morceau de foie de poids = 35 mg, je le broie avec un tampon tris contenant le substrat de l'enzyme que je veux doser son activité. Le dosage d'activité se fait par une méthode colorimétrique
la reaction qui se déroule est la suivante:
substrat non coloré + enzyme --> produit coloré
alors une fois ma reaction est terminée je centrifigue a 42 000 g pendant 10 min 4 C a facon d'obtenir un surneagant coloré contenant le produit coloré
et un culot dont moi je suppose quel contient les protéines (je pense a cette grande vitesse toute les proteines sont dans mon culot ?!!)
apres je prend le culot et j'ajoute 1 mL de triton 100x Hcl 0.1 M (0.4% v/w) puis je ferai une petite centrifigation a 10 000 g pendant 2 min et je dose la quantite des proteines par la methode BCA
c'est vrai comme ca ma methode ??
merci de votre réponse par avance

[Flyingbike]

Je ne sais trop quoi vous répondre.

Si votre tampon initial ne contient que du tris, en principe certaines des protéines seront solubles, d'autres pas et se retrouveront donc dans le culot. Une protéine soluble n'a malheureusement aucune raison de précipiter si elle est en solution, même a haute vitesse.

Si le protocole est connu et décrit, j'imagine qu'on peut considérer que les protéines sont au fond. Si c'est un nouveau protocole, c'est à vérifier, mais d'apres les infos il n'y a pas de raison que le culot contienne toutes les protéines de l'extrait.

[A voir en vidéo sur Futura]