Gène inconnu

[invite8af8418c]

Bonjours, je suis en TSTL Biotechnologie et j'ai un projet en fin d'année, le but est de prendre le gène thermostable d'une bactérie ( ici aquaticus thermus ) et de le mettre dans une autre bactérie ayant une température de croissance plus faible ( Escherichia coli ), nous espérons que en faisant cela nos Escherichia Coli puisse avoir une température de croissance de 90 à 100°c au lieu de 37°c. La technique pour extraire le gène serait la centrifugation ou une technique par digestion enzymatique, nous avons cela a été validé par notre professeur cependant il nous manque 2 élément pour pouvoir avancer, il nous manque le nom de ce gène se trouvant chez Aquaticus Thermus et si il se trouve sur un plasmide. Nous avons fait enorment de recherche mais nous trouvons quasiment que des articles universitaire en anglais n'aboutissant pas à grand chose, si quelqu'un connait la ou les réponses à mes questions je l'en remerci d'avance !
-----

[Zellus]

Bonjour,

Bonjours, je suis en TSTL Biotechnologie et j'ai un projet en fin d'année, le but est de prendre le gène thermostable d'une bactérie ( ici aquaticus thermus ) et de le mettre dans une autre bactérie ayant une température de croissance plus faible ( Escherichia coli ), nous espérons que en faisant cela nos Escherichia Coli puisse avoir une température de croissance de 90 à 100°c au lieu de 37°c.

Désolé de te couper dans ton élan, mais il n'existe pas qu'un seul gène qui permet à Thermus aquaticus de vivre à de hautes températures (50 à 80°C plutôt que les 90 à 100°C qui tu souhaites atteindre et c'est déjà pas mal ^^). Si elle peut résister c'est parce que beaucoup (toutes ?) de ses protéines sont capables de fonctionner dans de telles conditions. Donc plein de gènes sont nécessaires et un seul ne suffirait pas à Escherichia coli pour survivre.

La technique pour extraire le gène serait la centrifugation ou une technique par digestion enzymatique, nous avons cela a été validé par notre professeur

Je ne comprends pas bien comment tu veux purifier un gène par ces techniques.
Et votre prof vous a dit que vous pouviez réussir à faire survivre E. coli dans ces conditions ? En labo, on la met à 90-100°C pour la faire éclater.

[invite8af8418c]

Enfaite notre prof nous a dit qu'il était possible de prendre le gène qui donne la faculté a Thermus Aquaticus de survivre dans de telle conditions à E.coli seulement si ce gène se trouvait sur un plasmide, après nous cherchons encore et le fait que vous me disiez que "Si elle peut résister c'est parce que beaucoup (toutes ?) de ses protéines sont capables de fonctionner dans de telles conditions." me perturbe. Mais oui en faisant cela E.Coli devrait pouvoir vivre dans ces conditions ^^

[Loupsio]

a une température aussi élevée, les protéines se dénaturent, et ce n'est pas la seule conséquence (déstabilisation des lipides membranaires...)
son fonctionnement diffère sur plus d'un seul point pour survivre a de telle température, il n'y a pas un seul gène qui va être responsable de toutes les améliorations nécessaires pour survivre

[A voir en vidéo sur Futura]

[chamouulox]

Ton prof a révisé son CAPES dans Okapi...?

[Loupsio]

Ton prof a révisé son CAPES dans Okapi...?

Pas très constructif, mais en effet, soit la crise oblige les prof de français a assurer les cours de bio, soit ton prof te déteste intérieurement et souhaite que tu rate ton projet au plus haut point
pour un même rôle, certaines protéines seront totalement différentes (donc chaque gène en question est différent), d'autres auront des protéines chaperons pour les protéger, certaines bactéries thermophiles n'ont pas de bicouches lipidiques, mais d'une monocouche lipidique avec deux têtes polaires (je ne sais pas si c'est le cas pour elle) mais tout ca pour dire qu'il n'y a pas un gène "résistance a la température", c'est tout le fonctionnement qui est modifié, et que si tu ne change pas de projet, ou que tu n'envoie pas ton prof a des cours du soir de biologie, t'es mal parti pour ton projet (tu peux aussi acheter a ton prof "la biologie pour les nuls")

[toothpick-charlie]

si c'était aussi simple, j'aimerais bien qu'on me greffe le gène du cachalot qui lui permet de rester en apnée une heure à -1500m.

[invite8af8418c]

Ok merci pour vos réponses "constructives" mais ca ne m'aide en rien dans mon projet ^^

[chamouulox]

Le message que l'on essaye de te transmettre, c'est que ton projet a 0% de chance de donner lieu à un résultat intéressant.

Tout ce que tu en tireras c'est qu'en transfectant la bactérie avec un plasmide contenant le gène d'intérêt pour peu que tu arrives à l'amplifier, le cloner etc. (et toutes ces manips ne sont pas gratuites, vas te falloir le matos pour le faire), tu observeras qu'elle pète aussi bien à 100° que sans le plasmide.

Pour la simple et bonne raison que la survie des bactéries hyper thermophiles implique bien plus qu'un gène. C'est des milliers de gènes, et donc d'enzymes, des structures membranaires différentes etc.

Cham

[Loupsio]

Pourtant personne ne te donnera d'aide plus précieuse, que ce qu'on a fait jusque là
ca me parait claire, si tu change pas de projet tu va t'écraser sur le mur ou se trouvent déjà des restes de scientifiques bien plus expérimentés avec plus de temps et plus de moyens financiers et matériels qui on voulu faire la même chose

c'est tout un code génétique qu'il faudrait refaire, le fonctionnement quasi total est différent il y a de nombreuses adaptations a faire pour un changement de conditions de vies telles que la température
les changements seraient tels que de toute façon la bactérie finale ne pourra plus être appelé E. Coli vu qu'elle n'aura plus rien a voir avec les anciennes versions
Il faut que tu t'écartes de l'idée très éloignée du gène qui dit que un gène isolé est responsable du fonctionnement de tout un ensemble de choses
tu ne trouveras pas un gène qui permettra de vivre a ta bactérie a de hautes températures, c'est un ensemble qui autorise le milieu de vie dans un endroit donné

[piwi]

Bonsoir,

En oubliant la thermostabilité, ne serait il pas plus simple de prendre une lignée de bactérie possédant un plasmide codant pour un quelconque rapporteur (résistance à un antibio, Lacz, Luc, etc...). C'est exactement le même projet, sauf que cette fois ci, il est réalisable.
culture de la ligné 1 (portant le plasmide) et de la lignée 2 (pas de plasmide) sur milieu sélectif. Les bactéries 1 répondent à la sélection, pas les bactéries 2.
extraction et purification du plasmide de la ligné 1
transfection du plasmide dans la lignée 2
culture de la ligné 2 sur milieu sélectif. Cette fois ci, les bactéries 2 répondent.

Maintenant, si le projet doit être un tant soit peu original, c'est pas terrible. Mais techniquement, c'est exactement la même manip' que celle que vous vous proposiez de faire.

Cordialement,
piwi

[invite8af8418c]

Oui désolé de l'avoir prit comme ça :/ Merci Piwi nous voulons garder la même idée global du projet après nous pouvons changer des éléments !