technique PIFE + fluroscence

[Taz_79]

Bonjour,

Voila je me demandais qu'elle était la différence entre la méthode PIFE (Protein Induced Fluorescence enhancement) et une expérience de fluorescence sur une plaque 96 puits. Le but étant d'observer l'interaction entre 1 ARN et une protéine. Ce que je sais c'est qu'avec la PIFE, plus le pic de fluorescence est élevé plus l'interaction est importante. Dans ce cas là, la différence entre ces 2 techniques se serait plutôt au niveau du protocole ? L'une est plus facile à réaliser que l'autre ou bien l'obtention des résultats est plus rapide pour l'une que pour l'autre ???

je vous en remercie d'avance.
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[Mika-El]

Euuuuh,
Je ne m'y connais pas trop sur le sujet.

J'ai trouvé ceci
http://www.pnas.org/content/early/20...72108.full.pdf

Sa dit que FRET connaît des limites telles que la nécessité de connaître la protéine.
Ou encore une fluorescence identique lorsque la distance est de 3nm ou de 0nm.

Du coup, le PIFE c'est une nouvelle méthode pour améliorer cela.

Si tu t'aperçois que je dis une connerie, envoie un message privé STP.

Du coup, à ta place j'utiliserais PIFE.

[Flyingbike]

Les besoins et les prérequis sont totalement différents. Déjà en FRET il faut deux fluorophores, dont le sprectre d'émission de l'un recoupe au moins en partie le spectre d'absorbance de l'autre. Ensuite il faut "designer" une protéine qui porte un fluorophore et un ARN qui en porte un second. Pour le PIFE il faut un fluorophore, et je pense que la sensibilité d'acquisition doit être bien plus importante, du coup il faut savoir si on a besoin d'avoir une "résolution spatiale" inférieure a 10nm.

[Taz_79]

OK.
Du coup la PIFE serait une méthode quantitative avec une bonne sensibilité et la technique de fluorescence sur plaque 96 puits serait donc moins sensible. Par contre avec cette technique (96 puits) on peut quand même quantifier la fluorescence pour en déterminer l'interaction d'une protéine vis à vis d'un ARN ou ça reste une méthode qualitative?

[A voir en vidéo sur Futura]

[Flyingbike]

de quelle méthode parlez-vous ?

[Taz_79]

Sinon l'autre méthode, ce serait de fixer au fond d'une plaque des protéines et d'y ajouter des ARN marqués avec un fluorochrome. Si il y a interaction de l'ARN avec la protéine alors normalement il devrait il y aura une fluorescence. Du coup ma question c'est : est ce que on peut mesurer quantitativement l'intensité de fluorescence et ainsi pouvoir déterminer la fraction d'ARN liés et non liés ou bien est ce que c'est juste une méthode qualitative.

Il est vrai que ma question n'était pas très claire au dessus. ^^

[noir_ecaille]

Il faudrait une gamme étalon, et encore...

[Taz_79]

OK merci pour la réponse.

Bonne journée